Informe de Avance de Cambio de Escala: Kit de Inmunoaglutinación para Detectar Infección por Trypanosoma cruzi.

MARCIPAR IVAN; GARCIA VALERIA; GUGLIOTTA LUIS; GONZALEZ VERONICA; VEGA JORGE

2017-09-03/2018-12-26

Química

Enf.Endemicas-Mal de Chagas

Plan de actividades:Paso 1: Obtención de proteínas recombinantes de Trypanosoma cruzi. Se trabajará con nuevas proteínas recombinantes simples y quiméricas. Para su obtención, se utilizarán células de E. coli transformadas por shock térmico con un vector de expresión ligado a las secuencias de ADN de interés, que codifiquen las proteínas antigénicas del T. cruzi. Se inducirá la expresión y se realizará su purificación en una columna de pseudoafinidad a níquel. Paso 2: Síntesis de los látex funcionalizadosSe llevará a cabo las reacciones de polimerización para la producción de nanopartículas con morfología núcleo-coraza, con los tamaños y funcionalidad adecuados para su empleo como material base para el acoplamiento de las proteínas antigénicas. La síntesis se hará en dos etapas, produciendo primero partículas monodispersas de poliestireno y copolimerizando luego sobre ellas estireno y el monómero de funcionalización (ácidos metacrílico). Las partículas así obtenidas se purificarán y caracterizarán previo a su uso.Paso 3: Síntesis de los complejos látex-proteína.Se realizará el acoplamiento covalente de las proteínas sobre la superficie de partículas de látex con grupos carboxilo superficiales. Los grupos carboxilo se activarán mediante una carbodiimida soluble en agua, para convertirlos en acilureas, los cuales reaccionan fácilmente con los grupos amino de las proteínas, produciéndose de esa manera la unión covalente de estas últimas con los grupos carboxilo superficiales de las partículas.Paso 4: Pruebas de Inmunoaglutinación.Se analizará la reacción de inmunoaglutinación de los diferentes complejos látex-proteína al enfrentarlos a sueros de pacientes infectados (que presentan anticuerpos específicos contra el T. cruzi) y a sueros de pacientes normales. El seguimiento de la reacción se realizará mediante el método visual. Paso 5: Determinación de los Resultados EstadísticosSe evaluará el desempeño de los distintos reactivos mediante el análisis de la sensibilidad y especificidad del ensayo. Se determinará en función de estos resultados, el reactivo más adecuado para el diagnóstico de la infección por Trypanosoma cruzi