Comparación de los efectos de solubilización de los detergentes CHAPS y Triton x-100 sobre la membrana eritrocitaria

PABLO M. RODI; MARÍA CECILIA CORREGIDO; ANA MARÍA GENNARO

Córdoba

Congreso; XVII Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2011

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

Introducción: El descubrimiento de los rafts lipídicos ha mostrado la relevancia de las interacciones entre los lípidos que componen las membranas biológicas. Un método para investigar estas interacciones es estudiar la solubilización selectiva de las membranas con detergentes suaves. En nuestro grupo hemos estudiado en detalle el proceso de solubilización de la membrana eritrocitaria bajo la acción del detergente no iónico Tritón X-100, lo que nos ha permitido concluir que las interacciones colesterol-esfingomielina y el empaquetamiento lipídico son los factores que gobiernan el proceso de solubilización. También encontramos que una fracción importante de los lípidos de la membrana plasmática (DRM, o Detergent Resistant Membranes) resiste a la solubilización. Interesa investigar el proceso de solubilización bajo la acción de otros detergentes. Objetivos: Investigar el proceso de solubilización de membranas eritrocitarias humanas por el detergente zwitteriónico CHAPS. Resultados: La membrana eritrocitaria fue tratada, a 4º y a 37ºC, con una solución de detergente CHAPS a diferentes concentraciones, y al material insoluble obtenido se le realizaron determinaciones de fósforo y colesterol. Observamos que el aumento de la temperatura incrementa la capacidad de solubilización de la membrana por parte del CHAPS. A 2% de CHAPS se produce la hemólisis completa, pero todavía permanecen insolubles cantidades significativas de lípidos de membrana. Comparando estos resultados con los obtenidos para el detergente no iónico Triton X-100 observamos que la concentración de saturación en la membrana eritrocitaria para el detergente CHAPS está alrededor de 0.5% (a 4ºC), mientras que para el Tritón es mucho menor. Mediante espectroscopía de resonancia paramagnética electrónica (EPR) utilizando marcadores de espín liposolubles determinamos que las DRMs obtenidas con CHAPS presentan un mayor ordenamiento de las cadenas acílicas que la membrana original. Conclusiones • El aumento de temperatura incrementa la capacidad de solubilización de la membrana eritrocitaria por parte del CHAPS. • El detergente CHAPS es menos eficiente que el Tritón X-100 para la solubilización de la membrana eritrocitaria. Ésta es capaz de adsorber cantidades mucho mayores de CHAPS que de Tritón X-100 antes de comenzar a alterar la estructuración de su bicapa • A concentraciones menores que las que producen el 100 % de hemólisis, el CHAPS incorporado a la membrana de eritrocitos no produce cambios significativos ni en la morfología ni en el ordenamiento de los lípidos de membrana. • A concentraciones mayores que las que producen el 100% de hemólisis, persisten membranas insolubles a detergente (DRMs) • Las DRMs obtenidas a altas concentraciones de CHAPS (6%), al igual que con Triton X-100, presentan un ordenamiento lipídico mucho mayor que el de la membrana original.