Obtención y caracterización de una preparación de la enzima L-arabinosa isomerasa con características tecnológicas que permitan su empleo en la bioconversión de D-galactosa en D-tagatosa

MANZO, RICARDO M.; TORRES, PEDRO R.; MAMMARELLA, ENRIQUE J.

Ciudad del Este

Jornada; XIX Encuentro de Jóvenes Investigadores; 2011

Asociación Universidades Grupo Montevideo

La D-tagatosa es un monosácarido al cual se le asocian numerosos efectos beneficiosos para la salud, dado que se trata de un azúcar hipocalórico que promueve la pérdida de peso y posee propiedades prebióticas. La enzima L-arabinosa isomerasa es capaz de isomerizar D-galactosa a D-tagatosa. Para la obtención de la enzima, se ensayaron veintinueve cepas bacterianas cultivadas en medios convenientemente modificados para favorecer la inducción de la enzima. De todas ellas, fue seleccionada la cepa Enterococcus faecium E36 para desarrollar este trabajo. El homogenato fue elaborado a partir de una suspensión del enterococo en fase exponencial de crecimiento y agregada a un medio MRS modificado. Las células obtenidas por centrifugación fueron lisadas por sonicación. La enzima fue purificada a homogeneidad precipitando el homogenato con sulfato de amonio y efectuando una cromatografía de afinidad empleando un bioadsorbente específicamente diseñado. El peso molecular de la enzima fue de 55 KDa y el punto isoeléctrico resultó ser de 3.80. Estudios de caracterización arrojaron como condiciones óptimas una temperatura de 50 °C y un pH en el rango 7.0-7.5. Los iones Mn2+ y Co2+ funcionan como activadores y el L-arabitol como inhibidor. Los parámetros enzimáticos, asumiendo para esta enzima un comportamiento cinético de tipo Michaelis-Menten, arrojaron una VMÁX de 8x10-4 µmol min-1 mg-1 y una KM de 34 mM. La concentración óptima para la activación por Mn2+ es 0.31 mM y el valor de la constante de inhibición para el L-arabitol es de 7.1 mM.