Preparación de koji de Aspergillus niger con residuos de yerbamate

IURINIK, R.S.; BUTIUK, A.P.; MARTOS M.A.; MAIDANA S.A.; HOURS, R.A.

Encarnación, Paraguay

Jornada; II Jornada Internacional de Biotecnología para el Desarrollo Sostenible; 2019

El objetivo del presente trabajo fue producir un biocatalizador con actividad CHasa, denominado koji, mediante el crecimiento de una cepa A.nigerAKU 3302 en sustrato sólido, utilizando residuos de yerba mate como soporte e inductor.A. niger se cultivó en medio Czapek líquido modificado a 30°C, durante 48 h, a 180 rpm en frascos Erlenmeyers. El contenido total de cada Erlenmeyer, compuesto por pellets y medio de cultivo semi-agotado, fue utilizado para inocular bandejas de madera conteniendo el residuo de yerba mate estéril. Las bandejas fueron incubadas a 25 °C hasta queel micelio fúngicose desarrolló. El koji de A. nigerobtenido fue almacenado bajo refrigeración hasta su utilización como fuente de enzima CHasa. Para la determinación de la actividad CHasa, se mezcló en tubos de ensayo el koji con una solución de ACG en buffer (pH 6,5) y se incubó a 30 °C, 10-15 min, con agitación. Los productos de la hidrólisis del ACG se evaluaron por TLC,utilizando como solvente de corrida distintas proporciones de n-butanol:ácido acético:agua. La desaparición del ACG y la aparición de AC fueron examinadas bajo luz UV. Se observó el crecimiento del micelio fúngico sobre el soporte sólido a partir de los 2 días de incubación. El crecimiento del hongo se mejoró mediante el mezclado del cultivo 2 veces al día, a fin de mejorar la aireación y mantener una temperatura uniforme. El cultivo se mantuvo humedecido mediante el agregado de medio cuando fuera necesario. La FSS se dio por finalizada cuando se observó una buena germinación del hongo y el color del koji de A. niger cambió de marrón claro a marrón oscuro (7 días). Se seleccionó como solvente de corrida n-butanol:ácido acético:agua en la siguiente proporción 4:2:1 ( v/v/v). El análisis de la hidrólisis del ACG por TLC demostró que el koji de A. nigertenía actividad CHasa. Se observaron claramente manchas de ACG con intensidad decreciente y manchas de AC con intensidad creciente. El AC y el ACG presentan valores de Rf de 0,88-0,89 y 0,72-0,74, respectivamente, bajo las condiciones de ensayo.