Caracterización de levaduras de gránulos de kefir con potencial antifúngico

LEÓN ANGELA M.; ALCONADA TERESA; MOURE CANDELA

Montevideo

Jornada; Aplicaciones biotecnológicas de hongos y Levaduras; 2017

Facultad de Química, UdelaR. Montevideo

El kefir de agua (KA) y el de leche (KL) son bebidas obtenidas por fermentación de soluciones azucaradas o leche inoculadas con los correspondientes gránulos de kefir. Si bien se ha reportado capacidad antifúngica del kefir contra especies de Aspergillus y Penicillium, aún restan estudios basados en aislados de levadura. En este trabajo, se aislaron 24 levaduras a partir de soluciones de azúcar de mascabo o panela y de leche fermentada, con distintos gránulos KA y KL al 10% p/v, incubando 48 h a 30ºC. Las diluciones seriadas obtenidas a partir de los productos fermentados se sembraron en medio Yeast Glucose Cloramphenicol (YGC), incubando 5 días a 30 ºC. Las levaduras que presentaron diferencias entre sí, fueron aisladas mediante pasajes sucesivos en medio malta (MEA) y se conservaron en glicerol a -20ºC. Luego, se les extrajo el ADN y se les amplificó el fragmento ITS1-ITS2, para su posterior secuenciación. La capacidad antifúngica de los aislados se evaluó mediante la técnica de Reducción de la Germinación (RG) sobre conidios de A. flavus y A. parasiticus. Cada levadura se inoculó al 2% v/v en caldo malta incubando 48 hs a 30 °C. El producto fermentado se centrifugó y filtro en esterilidad obteniéndose los sobrenadantes libres de células (SLC). Las especies de Aspergillus se cultivaron en agar papa por 7 d hasta su esporulación para la obtención de soluciones de 104conidios/ml. Finalmente, a cada pocillo de una placa de 96 wells se le añadió 190µL del SLC y 10 µL de la solución de conidios incubando a 30 ºC 48 h. Las lecturas se realizaron a 580 nm en lector de placas y se calculó el %RG. Los resultados obtenidos mostraron efecto antifúngico diferencial de los aislados sobre las especies de Aspergillus analizadas, lo cual resulta de interés para la sanidad alimentaria.