Producción de una poligalacturonasa con capacidad macerante de tejidos vegetales por Wickerhamomyces anomalus en un medio sintético

ZUBRESKI, E.R.; BUTIUK, A.P.; NANCY, N.E.; MARTOS, M.A.

Córdoba

Congreso; IV Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2012

Ministerio de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Córdoba

Producción de una poligalacturonasa con capacidad macerante de tejidos vegetales por Wickerhamomyces anomalus en un medio sintético   Zubreski ER, Butiuk AP, Cruz NE, Martos MA   Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales. Universidad Nacional de Misiones. Misiones, Argentina.   Wickerhamomyces anomalus, una levadura autóctona de la Provincia de Misiones, Argentina, al crecer en un medio compuesto por glucosa, pectina de citrus e Yeast Nitrogen Base (YNB) produce,  en forma asociada al crecimiento, una enzima con actividad poligalacturonasa  (51 UE/mL). Esta enzima posee capacidad macerante de tejidos vegetales que son utilizados en la producción de alimentos. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el crecimiento de <i>W. anomalus y la expresión de la enzima PG, en un medio de cultivo sintético y de bajo costo, en reemplazo del medio YNB.  Se formuló un medio de cultivo (medio MS) que contenía glucosa (fuente de carbono y energía), pectina de citrus (inductor), sulfato de amonio, urea, extracto de levadura o triptona (fuentes de nitrógeno), sales, aminoácidos y vitaminas. El efecto de los factores nutricionales sobre el crecimiento y la expresión de la enzima PG se estudió eliminando los  componentes del medio de a uno por vez mientras se mantenía la concentración de los otros constantes, esto permitió evaluar el efecto de ese único nutriente. El efecto de las vitaminas se analizó en cajas Petri conteniendo medio MS y agarosa (30ºC, hasta 4 subcultivos de 24 h cada uno). El efecto de los demás factores nutricionales, se estudió a escala frascos agitados (30°C, 180 rpm, 10 h). La biomasa se separó por centrifugación y el sobrenadante se mantuvo a - 18°C hasta su utilización. La producción de PG por W. anomalus alcanzó un valor de ~ 50 UE/mL en el medio MS. Los cultivos realizados con pectina en una proporción del 50%, arrojaron bajos valores de actividad PG (~ 21,7 UE/mL), lo que indica la necesidad de un inductor para estimular la producción de la enzima. El crecimiento de W. anomalus fue despreciable en ausencia de biotina, pantotenato de calcio, piridoxina o tiamina. La omisión de los aminoácidos en el medio MS produjo una disminución del 77, 83 y 88 % en la producción de PG para triptófano, histidina y metionina, respectivamente. En presencia de triptona o extracto de levadura, la expresión de la enzima presentó una disminución del 14 y 22 % respectivamente. No hubo diferencia significativa en los medios que contenían sulfato de amonio y urea. En el medio MS conteniendo las 4 vitaminas esenciales (MSO), se obtuvieron valores similares de PG a los obtenidos usando el medio MS (~ 49,89 UE/mL). Al hacer una estimación de costos para 4 L de medio de cultivo se obtuvo que el medio YNB tendría un costo de  $ 86,0,  mientras que el medio  MSO de ~ $ 10. Fue posible obtener sobrenadantes con buena actividad PG en un medio sintético, de bajo costo, en reemplazo del medio YNB, apropiado para la producción de la enzima a mayor escala.