Crecimiento de Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson LPSC # 876 sobre sustratos sólido: Actividad quitinolítica y proteolítica.

GORTARI, M.C.; GALARZA, B.; CAVELLO, I.; HOURS, R.A.

Posadas, Misiones

Congreso; XII Congreso Argentino de Micología; 2011

Asociación Argentina de Micología

MAMB     CRECIMIENTO DE P. LILACINUS SOBRE SUSTRATO SÓLIDO: ACTIVIDAD QUITINOLITICA Y PROTEOLITICA Gortari María C1, 2; Galarza Betina C1, 2; Cavello Ivana1; Hours Roque A1. 1CINDEFI (UNLP; CCT-La Plata, CONICET). 2CIC-PBA   E-mail: gortari@biotec.org.ar     Palabras claves: Paecilomyces lilacinus, sustrato sólido, enzimas quitinoliticas y proteoliticas   La actividad enzimática de los hongos con actividad antagónica sobre huevos de nematodos es uno de los factores responsables de su actividad ovicida. El estudio de la producción de estas enzimas es fundamental en la evaluacion de hongos como potenciales agentes de control biologico de fitonematodos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la producción de la actividad quitinolitica y proteolitica de Paecilomyces lilacinus cultivado sobre sustrato sólido: escamas de quitina natural (principal constituyente estructural de los huevos de nematodos) en funcion del tiempo de cultivo. P. lilacinus se cultivó a temperatura ambiente durante 27 días en un medio sólido compuesto por escamas de quitina de cáscara de cangrejo humedecidas con Medio Mínimo para P. lilacinus e inoculadas con una solución de 1 × 107 esporos/ml. Se tomaron muestras en diferentes tiempos para las siguientes determinaciones: biomasa a partir del contenido de proteína total y producción de enzimas extracelulares (actividad quitinasa y actividad proteasa) a partir de extractos crudos. El contenido proteico se determinó por el método de Bradford utilizando albúmina bovina como estándar. La producción de quitinasa (actividad quitinolitica total) se estimó utilizando quitina natural como sustrato y midiendo la cantidad de azúcar reductor liberado por el método de Somogyi-Nelson usando N-acetyl-D-glucosamina (GlcNAc) como referencia. La unidad de actividad quitinasa fue definida como la cantidad de enzima capaz de liberar poder reductor correspondiente a 1 µg de GlcNAc a partir de quitina natural bajo las condiciones del ensayo. La actividad proteolitica se estimó sobre azocaseina definiendo la unidad de actividad como la cantidad de enzima que produce un incremento de absorbancia por minuto bajo las condiciones del ensayo. La producción de actividad quitinasa fue cíclica y mostró la utilización del sustrato quitina como única fuente de C y N en el crecimiento fúngico. La disminución de esta actividad puede explicarse por una rápida utilización de partículas de sustrato biodisponibles y la consecuente producción de producto final que actúa como represor, a una limitación de elementos nutritivos o a la desnaturalización enzimática producida por la actividad proteolitica del hongo. La producción de proteasas, proteinas solubles y biomasa se produjo a expensas de la actividad quitinolitica El nivel más alto de proteasas fue coincidente con una disminución de la actividad quitinolitica. El cultivo sobre escamas de quitina como sustrato sólido resultó adecuado para evaluar parámetros fisiológicos y de crecimiento de P. lilacinus. Sin embargo, el comportamiento observado en la actividad de estas enzimas hace necesario realizar estudios complementarios para identificar los productos de degradación de la quitina y la actividad enzimática sobre los mismos asi como el rol de las proteasas.