Optimización de un sistema de cromatografía de líquidos a escala nanométrica. aplicación a la separación de aminoácidos derivatizados en columnas capilares de fase inversa

RODENAS-MONTANO; ACQUAVIVA, A.; HERRERO MARTINEZ, J. M.; CASTELLS, C. B.

Mendoza

Congreso; 7° Congreso Argentino de Química Analítica; 2013

En los últimos años se ha puesto énfasis en la miniaturización de las técnicas analíticas, fundamentalmente con el objetivo de reducir la cantidad de muestra, el consumo de disolventes usados como eluyentes, y facilitar el acoplamiento de la etapa separativa con detectores de espectrometría de masas. La característica común de estas técnicas se basa en que la separación ocurre en un capilar; así la electroforesis capilar y la electrocromatografía fueron inicialmente introducidas para aumentar la eficiencia separativa. Más recientemente, se ha extendido a la cromatografía de líquidos, la cual en escala nanométrica, se conoce como nano-LC. En dichos sistemas, se emplean columnas capilares de diámetro interno de 100 µm o menores, y de longitudes de 10-25 cm. Éstas se encuentran rellenas con los materiales habituales de una columna de dimensiones convencionales, esto es, partículas de diámetros usuales de 1,8 a 5 µm, o bien estructuras monolíticas con características químicas seleccionadas de acuerdo al tipo de muestra a analizar. La adaptación de una separación convencional a escala nanométrica exige la adecuación de la introducción de la muestra, y la reducción del caudal al orden de los µL/min en proporción a las dimensiones de la columna capilar. Esto requiere de un divisor de flujo que reduzca el caudal de fase móvil. En el caso de usarse el sistema en gradientes, se deberá considerar algunos aspectos importantes. En primer lugar, la sincronización del comienzo del gradiente con la introducción de la muestra en la columna, con el fin de evitar la aparición de picos dobles, o de deformaciones en la forma de las bandas eluidas, por ello, es necesario optimizar el programa de la bomba con el del inyector. Otro aspecto a considerar, es el tiempo para el giro de la válvula inyectora, el cual no debe ser muy corto con el fin de evitar efectos de memoria (?carryover?) que puedan perjudicar la reproducibilidad en la cuantificación de los analitos. En este trabajo se optimizaron las condiciones para la operación de un instrumento de cromatografía de líquidos en escala nanométrica. Dichas condiciones se emplearon en la separación y análisis de citrulina y aminoácidos relacionados (arginina, glutamina, ácido glutámico, prolina y ornitina), previamente derivatizados con cloruro de 9-fluorenil metil cloroformiato (FMOC-Cl), empleando una columna de octadecilsílice de 100 µm de diámetro y 15 cm de longitud para su separación y detección UV.