Determinación de alcaloides de la familia de los harmanos en el alga Undaria pinnatifida por electroforesis capilar acoplada a espectrometria de masas

MARCOS TASCÓN; FERNANDO J. BENAVENTE MORENO; LEONARDO G. GAGLIARDI

Congreso; I Congreso Argentino de Cromatografia y Técnicas Afines, CACTA 2013.; 2013

CECROM (AQA)

P { margin-bottom: 0.21cm; direction: ltr; color: rgb(0, 0, 0); }P.western { font-family: "Liberation Serif","Times New Roman",serif; font-size: 12pt; }P.cjk { font-family: "WenQuanYi Micro Hei","MS Mincho"; font-size: 12pt; }P.ctl { font-family: "Lohit Hindi","MS Mincho"; font-size: 12pt; } Los Harmanos son un grupo de alcaloides que poseen efectos psicotrópicos en humanos, así como también son usados como precursores de algunos compuestos de interés farmacológico. Se pueden encontrar en diferentes especies vegetales y en concentraciones variables. Este estudio se centra en un alga comestible de origen asiático cuyo nombre científico es Undaria pinnatifida, comúnmente conocida como Wakame. La determinación de Harmanos en este alga invasiva en distintas zonas geográficas posee un gran interés, tanto para la industria alimentaria, como para la farmacéutica. Los Harmanos presentan una gran similitud estructural y su separación por electroforesis capilar constituye un interesante desafío. Todos ellos poseen una estructura primaria -carbolínica, con pequeñas variaciones en sus sustituyentes o simplemente en una insaturación, un grupo amino ionizable y son poco solubles en agua. En este trabajo se ha desarrollado un método de electroforesis capilar acoplada a la espectrometría de masas de trampa iónica (CE-IT-MS) para la separación y caracterización de seis Harmanos, Harmina, Harmalina, Harmol, Harmalol, Harmano y Norharmano. Los seis alcaloides se han separado a línea de base en menos de diez minutos empleando un capilar de sílice fundida (75 µm id x 60 cm LT) y un electrolito de separación de acetato de amonio 25 mM (pH 7.8) con un 10% (v/v) de metanol. Para la detección óptima en ESI modo positivo empleando una interfase de CE-MS de líquido auxiliar coaxial se ha utilizado una mezcla 60:40 (v/v) isopropanol:agua con un 0.05% (v/v) de ácido fórmico. En estas condiciones se ha evaluado la linealidad, los límites de detección, la repetitividad y la reproducibilidad del método. Como herramienta adicional para la identificación de los Harmanos en muestras reales se ha estudiado su fragmentación característica (MSn). El método desarrollado se ha aplicado al análisis de muestras de Wakame originarias de la costa atlántica de Galicia (España) y de Bretaña (Francia), que se adquirieron totalmente desecadas en diferentes supermercados. La extracción de los analitos se ha realizado mediante un pretratamiento sencillo que consiste en una extracción, seguida de una ultrafiltración con filtros de corte por peso molecular. Finalmente, el método completo ha resultado ser útil para la separación y cuantificación de todos Harmanos estudiados, teniendo como aspecto sobresaliente la fiabilidad de su identificación por confirmación estructural mediante los espectros de MS-MS.