Consideraciones y Avances en Métodos de Preconcentración Térmica “on-line” en Electroforesis Capilar para el Análisis de Aniones en Capilares de Sílice Desnuda.

MARCOS TASCÓN; FERNANDO J. BENAVENTE MORENO; LEONARDO G. GAGLIARDI

Santa Fe

Congreso; 6º Congreso Argentino de Química Analítica Santa Fe; 2011

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Los métodos de análisis mediante electroforesis capilar en zonas (CE) ofrecen elevadas resoluciones para el análisis de sustancias en solución a la vez que permite analizar macromoléculas biológicas en medios acuosos, similares a los fisiológicos, sin alterar las estructuras terciarias y cuaternarias. Esto resulta de particular interés en proteómica. Sin embargo, una de las mayores desventajas de las técnicas electroseparativas donde se analizan volúmenes extremadamente pequeños son los límites de detección si es que se utilizan detectores convencionales: UV o UV/Vis. Una de las maneras más prácticas de subsanar este inconveniente son los métodos de concentración en el capilar previo al análisis o preconcentración "online". [1] Entre los diversos métodos propuestos, los métodos de stacking utiliza una interfase o discontinuidad de condiciones a lo largo del capilar de manera tal que los analitos migren en un medio pero no migren en el otro medio una vez atravesada la interfase. Discontinuidades moderadas en las condiciones permiten conservar las estructuras de macromoléculas, ventaja que no ofrecen otros métodos de preconcentracion online como los que utilizan retención en lechos particulados y posterior remoción. Una opción interesante y escasamente estudiada es el stacking por temperatura o preconcentración térmica. Si bien los efectos de la temperatura han sido extensamente estudiados en electroforesis capilar prácticamente todos los estudios han tratado sobre los perfiles de temperatura generados por el calentamiento de Joule. Sin embargo, un gradiente o escalón de temperatura podría constituir una zona de preconcentración desde donde podrían ser fácilmente removidos los analitos concentrados para su posterior análisis. Existen escasos trabajos que traten sobre métodos de stacking térmico[2, 3, 4]. Los resultados no han sido alentadores y los estudios no han tenido continuidad. Esto se debe a que el diseño experimental para lograr que una interfase de temperatura genere una acumulación de analito es compleja. Adicionalmente, tener tramos de tubo capilar a diversas temperaturas implica tener diferentes resistencias, movilidades de cada uno de los iones, distintas contribuciones al flujo electrosmotico (EOF) total, etc.. En este trabajo mostramos resultados de estudios previos e independientes sobre las distintas variables, utilización de un modelo predictivo para encontrar las condiciones experimentales adecuadas, las consideraciones a tener en cuenta para lograr la concentración y los avances logrados en nuestros estudios aplicados a la concentración de aniones empleando tubos de sílice desnudo, en donde el EOF tiene dirección contraria a la movilidad del analito. [1] Simpson Jr. S. L.; Quirino, J. P.; Terabe ,Sh.. J. Chromatogr. A, 1184 (2008) 504-541 [2] M.Mandaji, G. R. Bensam, R. B. Hoff, S. Hillebrand, E. Carrilho, T. L. Kist, Electrophoresis 30 (2009) 1501–1509 [3]Balss, K. M., Vreeland, W. N., Phinney, K. W., Ross, D. Anal. Chem..76 (2004)7243-7249 [4] Hoebel, S. J., Balss,K. M. et al.. Anal. Chem..78 (2006)7186-7190