Efecto de la activación colinérgica sobre la progresión tumoral en células de mama humana.

MARTINEZ PULIDO, PAOLA; OROÑO, MANUEL; CASTRO MAR¨ªA ESTER; LOMBARDI GABRIELA; SALES, MARIA ELENA

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunión anual de la Sociedad de Investigación Clínica; 2014

Sociedad Argentina de Ivestigación clínica y Sociedad Argentina de Inmunología

Para determinar el rol de los receptores muscarínicos (RM) en la tumorigénesis mamaria, transfectamos células no tumorigénicas de mama humana, MCF-10A y obtuvimos tres líneas estables que expresan diferentes subtipos de RM: M3, M4 o M3 (MCF-10A-M). En la progresión tumoral, la degradación de la matriz extracelular es central para la generación de neovasos y el crecimiento tumoral, por esto estudiamos la expresión y actividad de la metaloproteinasa-9 (MMP-9). Por Western blot observamos que, tanto las células MCF-10A-M como las células tumorales de mama humana MCF-7 expresan MMP-9, enzima que no se detectó en células MCF-10A. La estimulación con el agonista colinérgico carbacol (CARB) aumentó  significativamente la expresión de MMP-9 con respecto al control sin tratamiento (control=100%), MCF10-A-M3 (178,0+5,2%), MCF10-A-M4 (176,7+12,1%), MCF10-A-M3M4 (223,0+23,4%) (n=3; p0,05 vs. control). Este efecto fue revertido en presencia del antagonista muscarínico atropina (AT). En ensayos de zimografía, observamos que el CARB incrementó la actividad de MMP-9 en las células MCF-10A-M y el efecto se revirtió en presencia de AT. Además analizamos la neovascularización in vivo (densidad= Número de vasos/mm2) (media + DS; n=6; p0,05) observando en todos los casos una respuesta positiva: MCF10-A-M3:6,11+,43; MCF10-A-M4:5,01+0,83; MCF10-A-M3M4:6,47+0,66 con respecto a MCF-10A:3,72+0,35 y con valores semejantes a los de las células MCF-7:5,35+0,93. También evaluamos el crecimiento tumoral in vivo, inyectando las células transfectadas (106 cel./0,1 ml) en ratones nude, en forma s.c. Todas las células formaron tumores (mm3 +DS; n=5): MCF10-A-M3:1124+614; MCF10-A-M4: 1680+88 y MCF10-A-M3M4: 860+169 a diferencia de las células MCF-10A. Concluimos que la expresión de los RM en células no tumorigénicas de mama humana sería suficiente para desencadenar el proceso de malignización celular.