Percepción de interrupciones del sombreado vegetal por UVR8

ROMINA SELLARO; VICTORIA MORICONI; JORGE J. CASAL

Tucumán

Congreso; III Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos; 2016

Grupo Argentino de Fotobiología

En el campo, los cultivos no se encuentran produciendo un canopeo denso y uniforme de hojas donde la radiación solar las intercepta uniformemente, si no que son irradiadas de forma inderecta y/o difusa, donde plantas sombreadas durante buena parte del día pueden experimentar la exposición a rayos de luz solar directa (sunflecks) en determinados momentos. En este contexto denominamos sunflecks a cualquier interrupción transitoria del sombreado, independientemente de la duración. Enfocándonos en la proteína UVR8 (UV RESISTANCE LOCUS 8) fotorreceptor de radiación UV-B, los objetivos de este trabajo son visualizar su posible rol en las respuestas a nivel de sombreado y sunflecks en condiciones de radiación natural. Para ello, plantas de Arabidopsis thaliana de genotipo salvaje y uvr8 fueron cultivadas por 7 dias bajo radiacion natural a la sombra de un canopeo denso (PAR=10 µmol.m-2.s-1). Luego son transferidas durante 2 horas a canopeos naturales estableciendo un amplio gradiente en niveles de sombreado (PAR= 2, 60 y 500 µmol.m-2.s-1) e incluyendo controles no sombreados (PAR=1500/2000 µmol.m-2.s-1 según la epoca del año) y de luz solar directa deficiente de UV-B mediante filtros de poliéster (Mylar-D 0,1-mm). Pasando el tiempo estipulado, se cosecharon las muestras. Como la radiación UV-B hace que UVR8 pase de formar dímeros a monómeros, que son considerados la forma activa del receptor (1Heijde and Ulm, 2012), pudimos determinar mediante blots de proteínas revelados con anticuerpos anti-UVR8 la proporción de UVR8 activo en cada tratamiento. En cuanto a las respuestas a los sunflecks, evaluamos si UVR8 es capaz de percibir el momento y la duración en que recibe luz solar plena. De modo similar, plantas de A. thaliana y de uvr8 de 7 dias crecidas bajo radiación natural a la sombra de un canopeo denso (PAR=10 µmol.m-2.s-1) fueron transferidas a luz solar (PAR=2000 µmol.m-2.s-1) durante 2 horas para después regresar a la sombra hasta completar 8 horas. Se cosecharon las muestras en los siguientes momentos del fotoperiodo: 0h (bajo sombra), durante el sunfleck en los siguientes tiempos: 0:05h, 0:15h, 0:30h, 1h, 2h (luz), y una vez que regresaron a la condición inicial de sombra, se tomaron muestras a las 2:30h, 3h, 5h y 8h. Controles adicionales se mantuvieron durante todo el experimento bajo sombra y se cosecharon 2 y 8 h después del comienzo del sunfleck. Se realizaron los blots de proteínas revelados con anticuerpos anti-UVR8 como se describió anteriormente. Como resultado hemos obtenido que a medida que aumentan los niveles de UV-B en los diferentes grados de sombra del dosel, la proporción de UVR8 en su conformación activa es mayor, y que en caso de tratamientos con sunflecks, UVR8 también responde a los momentos en que la luz solar incide directamente sobre las plantas, siendo capaz de volver a su conformación inactiva una vez finalizados. UVR8 no solo es realmente capaz de percibir los distintos niveles de UV-B causados por el sombreado, si no que también responde a los momentos de sunfleck.