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Las proteínas CRISP1-4 (Cysteine-RichSecretoryProteins) se expresan mayoritariamente en el tracto reproductor de mamíferos y participan en el proceso de fertilización. Sin embargo ratones deficientes en CRISP1, 2 ó 4 resultaron fértiles. Para investigar la relevancia funcional de CRISP3, desarrollamos ratones Crisp3-/- y doble knockout Crisp1-/-/Crisp3-/- utilizando la técnica CRISPR/Cas9, para lo cual se diseñaron dos sgRNAs dirigidos contra el exón2 de Crisp1 y Crisp3. Éstos sgRNAs, junto con el mensajero deCas9 fueron microinyectados en cigotas de ratones C57BL/6. Mediante PCR y SDS-PAGE se identificaron ratones que presentaban mutaciones y se verificó que las mismas se transmitieran a las crías. Luego, por medio de secuenciación del ADN se seleccionaron aquellos animales que presentaban mutaciones deletereas en los genes de Crisp3 o de Crisp1 y Crisp3. El análisis por Western Blot de la expresión de las proteínas CRISP reveló que tanto los animales Crisp3-/- como Crisp1-/-/Crisp3-/- carecen de CRISP1 mientras que CRISP2 y CRISP4 no se vieron afectadas. Las tasas de fertilidad evaluadas por apareo natural fueron significativamente menores en machos y hembras de ambas colonias, sugiriendo que la fertilidad normal observada en los knockouts individuales involucra mecanismos compensatorios entre las distintas CRISP. Con el fin de generar ratones carentes de los cuatro miembros de la familia CRISP, los sgRNAs fueron microinyectados en cigotas Crisp2-/-/Crisp4+/-. Resultados recientes confirmaron la exitosa generación de ratones knockout para las cuatro CRISPs. Consideramos que estos estudios contribuirán a una mejor comprensión de la relevancia de esta importante familia para la fertilidad