Nueva proteína quinasa dependiente de calcio de Solanum tuberosum, StCDPK7, asociada a cloroplastos y estrés biótico

ELISA FANTINO; FRANCO SANTIN; GOMEZ POVIÑA JUAN CRUZ; RITA ULLOA

Mar del PLata

Congreso; XXX Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2014

Las quinasas de proteínas dependientes de calcio, CDPKs, son sensores/transductores del catión que se inducen/activan en respuesta a factores bióticos y abióticos. Forman familias multigénicas con gran homología de secuencia entre sí a excepción del dominio aminoterminal (NTV) que regula la localización subcelular de la enzima. En Solanum tuberosum se clonó la isoforma StCDPK7 perteneciente al grupo I, cuyo NTV de 120aa incluye un péptido tránsito a cloroplastos. Se detectó el transcripto en hojas y tallos de plantas cultivadas in vitro, en bibliotecas de expresión de estolones y hojas de S.t. var. Desiree y en plantas cultivar Spunta infectadas con P. infestans. La proteína recombinante StCDPK7-His6x presenta actividad de quinasa dependiente de calcio. Se obtuvieron sus parámetros cinéticos (Km, Vmax, Ki) y se analizó el efecto de quelantes y antagonistas de calcio y CaM y de cofactores (Mn2+ y Mg2+) sobre su actividad. Ensayos de SDS-PAGE y electroforesis 2D indicaron que StCDPK7 se autofosforila y que tanto su actividad como la autofosforilación aumentan en función de la concentración de sustrato. En ensayos de expresión transitoria en N. benthamiana se detectó fluorescencia correspondiente a la proteína de fusión NTV-StCDPK7-GFP únicamente en los cloroplastos de células oclusivas confirmando la predicción in silico.