Análisis de la familia CDPK en plantas de papa

ELISA FANTINO; FRANCO SANTIN; VERÓNICA GIAMMARIA; RITA ULLOA

Mar del Plata

Congreso; Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2012

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

En plantas, las quinasas de proteínas dependientes de calcio (CDPKs) son sensores/transductores de calcio que se inducen/activan en respuesta a factores bióticos y abióticos. Componen familias multigénicas de aproximadamente 30 miembros. En Solanum tuberosum se caracterizaron 5 isoformas, StCDPK1, 2 y 3 (Raíces et al., 2003; Gargantini et al., 2009; Giammaria et al., 2011) y StCDPK4 y 5 (Kobayashi et al., 2007). In silico se identificaron 22 nuevas isoformas en el genoma de Solanum phureja sugiriendo que la familia CDPK de papa esta compuesta por 27 miembros. El alineamiento de las 27 secuencias codificantes por ClustalW con secuencias de CDPKs de Arabidopsis thaliana y Oryza sativa y posterior análisis por el método Neighbor Joining, programa MEGA5, indica que las isoformas de papa se agrupan en conjuntos determinados previamente para AtCPKs y OsCDPKs. Se detectó actividad de CDPK en extractos solubles y particulados de hojas, tallos y raíces de plantas de invernadero. Veintitrés isoformas presentan una Gly en posición 2 y una Cys en posición 4/5 indicando que podrían miristoilarse o palmitoilarse, modificaciones involucradas en su asociación a membranas. Mientras que 10 de ellas presentan el consenso (MGXXXT/S) de miristoilación, otras 10 presentan una Asn en posición 3 que podría promover su miristoilación (Yamauchi et al., 2010). Se diseñaron oligonucleótidos específicos sobre el N-terminal de las nuevas isoformas y se confirmó la presencia de 19 amplicones en los genomas de S. tuberosum L var. Spunta y var. Desirée y de la subespecie andigena. Se analizó su expresión por RT-PCR semicuantitativa usando como templado bibliotecas de expresión de hoja y estolón y ADNc sintetizado a partir de ARN total de hojas. Casi todas las isoformas están presentes en ambos tejidos con intensidad variable y sólo una se expresa exclusivamente en estolón. La aplicación DM RNASeq Coverage del Potato Genome Sequencing Consortium mostró que estos datos coinciden con lo observado.