informe Final. Instituto Nacional del Cancer

LAURA TODARO

2013-08-15/2014-05-09

Biológica

Salud humana

Durante el período, se realizaron diferentes protocolos de transfección sobre la línea LM38-LP, utilizando en un comienzo, plásmidos controles y siRNAs disponibles en el laboratorio, con el objeto de lograr a partir de ahora, la inhibición transciente en la expresión de los receptores nucleares RARa, RARb y RARg. La línea LM38-LP es de difícil transfección, por lo que era importante lograr estos ajustes técnicos. Se realizaron experimentos de puesta a punto de las concentraciones óptimas de uso de cada uno de los agonistas retinoides, realizando ensayos de crecimiento. Además, se evaluó la capacidad proliferativa de LM38-LP bajo tratamientos combinados de retinoides y quimioterápicos convencionales como Doxorrubicina o Paclitaxel. A partir de La línea LM38-LP tratada con agonistas específicos de los Receptores RARa, RARb o RARg, se evaluaron: - la expresión de ARNm de diversos receptores retinoides por RT-PCR, - la formación de mamosferas primarias y secundarias, así como la capacidad clonogénica de estas células stem. - se analizaron parámetros relacionados a la progresión tumoral, como la actividad de metaloproteasas solubles y la capacidad migratoria. Además, se diseñaron nuevos primers para RT-qPCR para medir genes blancos frente a tratamientos cortos. Se incorporaron al estudio, líneas de cáncer de mama humanas (MCF-7 y T47D) y murinas (4T1), para las cuales se generaron su stock semilla. Se evaluó por RT-PCR semi-cuantitaviva la respuesta al ATRA de las mismas, observando la diferencia en la expresión de las distintas isoformas de los receptores RAR.