Desarrollo de una estrategia de Purificación de proteínas utilizando un péptido bifuncional

LEOPOLD, MARÍA JESÚS; OGGERO, MARCOS; CEAGLIO, NATALIA

Santa Fe

Encuentro; XXIV Encuentro de Jóvenes Investigadores de la UNL (EJI 2021); 2021

Universidad Nacional del Litoral

INTRODUCCIÓNEn nuestro laboratorio hemos diseñado un péptido de 15 aminoácidos denominado mGMOP como etiqueta para la preparación de proteínas de fusión. Esta etiqueta deriva de la región N- terminal del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos humano (hGM-CSF) y se caracteriza por dos propiedades. Por un lado, presenta una elevada probabilidad de O- glicosilación, con 6 sitios potenciales para la unión de O-glicanos; y, por otro lado, contiene un epitope lineal en su N-terminal (secuencia APAR) reconocido por un mAb (CC1H7), también obtenido en nuestro laboratorio (Oggero y col., 2004). Ambas características determinan la bifuncionalidad del péptido mGMOP, que puede ser utilizado simultáneamente para conferir propiedades biológicas mejoradas a las proteínas de fusión por su capacidad de híper-O- glicosilación, y como sistema para la cuantificación y/o purificación de las mismas. En trabajos previos se logró fusionar la etiqueta mGMOP a la región N-terminal del interferón-α2b recombinante humano (rhIFN-α2b), exhibiendo la quimera mGMOP-IFN una mejora significativa en sus propiedades farmacocinéticas con respecto al rhIFN-α2b no modificado (Sales y col., 2021). En el presente trabajo, se propuso evaluar el potencial de la etiqueta como herramienta para la purificación de proteínas, explotando el aumento de la afinidad que se produce en la interacción mAb CC1H7-mGMOP en presencia de alta fuerza iónica.OBJETIVOS? Evaluar la capacidad de la etiqueta peptídica bifuncional mGMOP para ser empleada en procedimientos de purificación de proteínas por inmunoafinidad.CONCLUSIÓNLa capacidad dinámica a C/C0=0,1 fue 3,2 veces mayor para la condición Na2SO2 1 M pH 8 con respecto a la siembra en ausencia de sal, mientras que para el resto de la sales fue similar o ligeramente mayor. No obstante, a relaciones C/C0>0,1 estas diferencias se acrecentaron, lo que quedó evidenciado por la menor pendiente de la línea de tendencia de las curvas de breakthrough cuando se sembró en presencia de sales con respecto a las realizada en ausencia de sal. En conclusión, la presencia de sal permitiría sembrar una mayor masa de mGMOP-IFN en el mismo volumen de matriz. Así, resultaría una estrategia eficaz para optimizar el proceso de purificación de proteínas de fusión al novedoso péptido.