Estudio de la localización subnuclear de los distintos dímeros de C/EBPb mediante Bimolecular Fluorescence Complementation

LUCIANA PAOLA PRENDES; GRACIELA PIWIEN PILLIPUK

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)- Reunión de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2008

SAIC (Sociedad Argentina de Investigación Clínica)

Los C/EBPs son factores de transcripción de tipo bZIP que regulan procesos de diferenciación celular, entre ellos la adipogénesis. C/EBPb posee distintas isoformas denominadas LAP y LIP, las que pueden formar homo- y heterodímeros. Como nada se sabe sobre la regulación de la dimerización, ni la distribución subnuclear de los mismos, éste fue el objetivo de nuestro trabajo. La técnica convencional de inmunofluorescencia indirecta no permite identificar los distintos dímeros de C/EBPb en el ambiente celular por lo que utilizamos Bimolecular Fluorescente Complementation (BiFC), novedosa técnica basada en la complementación de los fragmentos N- y C-terminal de una proteína fluorescente como resultado de la interacción entre las proteínas a las que dichos fragmentos están fusionados, evento que determina la recuperación de fluorescencia. Pudimos demostrar en preadipocitos 3T3-L1, que los homodímeros de LIP se localizan exclusivamente en áreas heterocromáticas. En cambio, los homodímeros de LAP al igual que los heterodímeros LAP/LIP se ubican tanto en heterocromatina como en áreas eucromáticas. Además, los homodímeros bZIP (poseen sólo la región básica de unión al ADN (b) y el cierre de leucina (ZIP)), se localizan exclusivamente en áreas heterocromática. Así como también, observamos por IFI que LIP al que se le delecionó sólo el ZIP localiza en heterocromatina. Estos resultados sugieren que el dominio N-terminal de transactivación presente sólo en LAP regula la localización eucromática de los dímeros LAP-LAP y LAP-LIP y que no es necesario ni el dominio N-terminal ni el de dimerización (ZIP) para la localización de LIP-LIP en regiones heterocromáticas. En síntesis, demostramos por primera vez que los distintos dímeros de C/EBPb exhiben una distribución nuclear diferencial, posiblemente constituyendo así un importante mecanismo para regular la expresión de genes blanco al existir una disponibilidad diferencial de homo- y heterodímeros en distintos dominios nucleares.