CITOTOXICIDAD DEL COBRE SOBRE LA LÍNEA CELULAR DE HEPATOCITOS HUMANOS HepG2

COALOVA, ISIS; CHAUFAN G,; RÍOS DE MOLINA M. C.

Santa Fe, Argentina

Congreso; III CONGRESO ARGENTINO DE LA SOCIEDAD DE TOXICOLOGIA Y QUÍMICA AMBIENTAL (SETAC); 2010

Se estudió el efecto de la toxicidad del cobre sobre una línea celular de hepatocitos (HepG2). Las células fueron crecidas en medio MEM conteniendo penicilina 100 U/ml, estreptomicina 100 mg/ml, anfotericina B 0,25 mg/ml y suero fetal bovino (SFB) 10 % (v/v), en ambiente húmedo con CO2 al 5 % (v/v), a 37 ºC, y sembradas en placas de 96 pocillos a 80 % de confluencia. Se evaluó la respuesta celular a la exposición a dosis crecientes (1-200 mM) de dos sales de cobre (CuSO4 y CuCl2), por 24 y 48 hs, con y sin suplemento de suero fetal bovino (SFB), mediante el ensayo del MTT ([bromuro de 3-(4,5-dimetil tiazol-2-ilo (-2,5-difenil tetrazol)], para detectar actividad mitocondrial y la inducción de actividad caspasa 3/7, empleando como sustrato colorimétrico Ac-DEVD-pNA (acetil-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilida). Los resultados indican que, con ambas sales (200 mM) sin suplemento de suero, se produce un descenso del 70 % y del 90 % de la viabilidad celular, a las 24 hs y 48 hs respectivamente. Al realizar los mismos ensayos en presencia  de SFB 10 % se observó una relación dosis respuesta bifásica, característica del fenómeno de hormesis y un menor descenso de la viabilidad celular a las concentraciones más altas ensayadas. Sobre los mismos cultivos, se ensayó la inducción de actividad caspasa 3/7 en presencia de CuSO4 200 mM o de  CuCl2 200 mM. Los resultados indicarían que tanto el CuSO4 como el CuCl2 inducen un aumento de la actividad caspasa 3 entre un 60 y 70 % respectivamente, con respecto al control. Se puede concluir que para que se produzca el efecto hormético es necesaria la presencia de suero, mientras que el mismo suero enmascara la citotoxicidad producida por las altas concentraciones de las sales de cobre sobre los hepatocitos. El aumento de la actividad caspasa 3 obtenido con 200 mM de CuSO4 o de CuCl2 sugiere que dichos tratamientos llevan a una muerte celular por apoptosis.