Screening de uma biblioteca subtrativa de Drosophila koepferae criada em dois recursos.

CORIO C.; SOTO E.; BETTI M.; HASSON E.

Águas de Lindóia, SP, Brasil.

Congreso; 55º Congresso Brasileiro de Genética.; 2009

Sociedade Brasileira de Genética

Drosophila koepferae é uma espécie cactófila, pertencente ao grupo repleta, que nanatureza se cria em dois tipos de recursos alternativos, os tecidos necróticos de espéciesdos gêneros Trichocereus e Opuntia, com uma marcada associação com o primeiro.Estas cactáceas diferem tanto na sua composição química quanto na microfaunaassociada à decomposição dos seus tecidos. As moscas de D. koepferae, emergidas em ambos os substratos, demonstram diferenças de tipo fenotípico em vários caracteres. Algumas dessas diferenças, no nível de caracteres relacionados ao fitness, fazem supor que D. koepferae faz um melhor aproveitamento do Trichocereus. Uma maneira de investigar os mecanismos implicados no aproveitamento diferencial associado à utilização de cada recurso é o estudo dos padrões de expressão gênica específica (ESTs). Para tal fim, geraram-se duas bibliotecas de ESTs, a partir de larvas em terceiro estágio criadas em ambos recursos. Com o objetivo de enriquecer os transcritos próprios de cada tratamento, utilizou-se a técnica de hibridação subtrativa de supressão da PCR. Deste modo, ao final da subtração obtiveram-se duas bibliotecas, uma enriquecida em genes que se sobre-expressam em T. terschekii, e uma biblioteca complementarenriquecida em genes sobre-expressados em Opuntia sp. Os produtos resultantes dasupressão forem clonados, e posteriormente sequenciados. As sequências obtidas foramcomparadas com bases de dados on-line de todas as proteínas conhecidas de Drosophilamelanogaster. Identificaram-se doze genes sobre-expressados nas larvas criadas em T.terschekii, e nove genes no caso de Opuntia sp. Os genes identificados estão envolvidos em processos biológicos tão diversos como: oxidação de etanol, regulação da expressão gênica, ciclo dos ácidos tricarboxílicos, atividade peroxidase, atividade metaloexopeptidase, desenvolvimento da glândula linfática e manutenção da polaridade em células epiteliais.A grande variedade de processos biológicos afetados pelos substratos de cria demonstraque a sua utilização é um caráter complexo, com uma intrincada arquitetura genética.A informação obtida nos permite estudar como os mecanismos de regulação podem seralvos da seleção em processos de especiação ecológica. Como perspectiva futura, nós propusemos identificar, mediante o mesmo ensaio experimental, os genes sobre expressados na espécie irmã D. buzzatii, que a diferencia desta, o seu substrato preferido de cria é Opuntia. Assim, com esta informação, tentaremos responder perguntas sobre a ecologia molecular e a utilização de recursos naturais na marcação de processos especiogênicos.