CROSS-TALK ENTRE LAS VÍAS DE AMPC/PKA Y SFK/FOSFATASAS EN LA CAPACITACIÓN DEL ESPERMATOZOIDE HUMANO

BATTISTONE MA; DA ROS, V.; SALICIONI, A.; NAVARRETE, F.; WEIGEL MUOZ, M.; VISCONTI, P.; CUASNICU P S

Congreso; LVII Reunion Cientifica de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica y LX Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Inmunologia; 2012

Estudios recientes en roedores postulan que el aumento enla fosforilación de proteínas en tirosina que ocurre durante lacapacitación de los espermatozoides involucraría no sólo la víaAMPc/PKA sino también la inactivación de fosfatasas mediadapor la familia de kinasas SRC (SFK). En el presente trabajo, investigamos la participación de ambas vías y su posible cross-talkdurante la capacitación de espermatozoides humanos. Los nivelesde AMPc intracelular, evaluados por radioensayo a lo largo de lacapacitación (18 hs), mostraron un valor máximo al minuto deincubación (p<0.05), seguido de aumentos tanto en la fosforilaciónde los sustratos de PKA (1 min) como en residuos tirosina (6 hs)evaluados por Western blot. La vía de SFK/fosfatasas fue analizadamediante el uso de inhibidores de estas enzimas. En presenciade un inhibidor de SFK (SKI606), se observó una disminución enla ocurrencia de ambas fosforilaciones, no detectada cuando losespermatozoides fueron incubados con SKI606 en presencia delinhibidor de fosfatasas ácido okadaico (AO), sugiriendo que la SFKinactivaría a las fosfatasas. Resultados similares se observaron alevaluar la motilidad espermática por CASA en muestras control ytratadas con SKI606 y/o OA. Finalmente, se estudió la existenciade un cross-talk entre las vías descriptas. Así, la presencia deun análogo de AMPc (dibutiril AMPc), capaz de inducir la fosforilaciónen sustratos de PKA y en residuos de tirosina, no produjoningún efecto cuando SFK estaba inhibida por SKI606. Más aún,la inhibición de las fosfatasas por OA no fue capaz de inducir lasfosforilaciones cuando la incubación se realizó en presencia deH89, inhibidor de PKA. En conjunto, estos resultados indican laparticipación y cross-talk de las vías AMPc/PKA y SFK/fosfatasasconducentes a la fosforilación de proteínas durante la capacitacióndel espermatozoide humano.