COCULTIVO DE EMBRIONES PORCINOS CON CELULAS EPITELIALES OVIDUCTALES PORCINAS EN MONOCAPA

LORENZO, MS.; TEPLITZ, G.; CRUZANS, PR.; LUCHETTI, CG.; LOMBARDO, DM.

CABA

Jornada; X JORNADAS DE JÓVENES INVESTIGADORES; 2021

Secretaría de Ciencia y Técnica FVET-UBA

La producción de embriones porcinos in vitro es una biotecnología subóptima. Elcocultivo de embriones y células somáticas es una herramienta para mejorar lascondiciones del cultivo. Las células epiteliales del oviducto producen fluido oviductal ypodrían usarse para recrear el entorno in vivo. El objetivo de este trabajo fue evaluar elefecto del cocultivo de embriones porcinos producidos in vitro con una monocapa decélulas epiteliales oviductales porcinas (CEOP) sobre el desarrollo y la calidadembrionaria. Los ovocitos se obtuvieron por aspiración folicular de ovarios de faena y semaduraron in vitro durante 44 h a 39°C, con 5% de CO2 y atmósfera saturada de humedaden medio 199 suplementado, en presencia de AMPc y hmG durante las primeras 22 h.Para la fecundación in vitro (FIV) se utilizó semen refrigerado a 17°C, de machos defertilidad probada. La gametas se coincubaron en gotas de 100 μL de medio de FIV(medio 199 suplementado con lactato de sodio, piruvato de sodio, cafeína y albúminasérica bovina), conteniendo 20 ovocitos por gota y 1x106 espermatozoides/mL, durante 4h a 39°C, con 5% de CO2, 7% O2 en atmósfera saturada de humedad. Las CEOP seobtuvieron a partir de istmos de oviductos de cerdas en diestro y se criopreservaron hastasu uso. Para este trabajo se utilizaron CEOP de pasaje 1, sembradas 48 h antes a 50000cel/mL. Los presuntos cigotos se lavaron con TALP-Hepes y se reasignaronaleatoriamente a uno de los siguientes grupos: Control (NCSU 23 con lactato y piruvato;n=265), CEOP-1 (medio control + CEOP; n=206), CEOP-1 + SFB (medio control +CEOP y 2,5% suero fetal bovino; n=206), se cultivaron en las condiciones antesdescriptas. Al día 2 de cultivo se cambió el medio a NCSU 23 con glucosa y sin células,en todos los grupos. El clivaje se determinó al día 2 y el porcentaje de blastocistos al día7, bajo microscopio de contraste de fase. Para evaluar la calidad embrionaria, losblastocistos se fijaron con paraformaldehído al 4% y se tiñeron con Hoechst 33342(cantidad de células por embrión) y con TUNEL (índice apoptótico: células en TUNELpositivas/total de células). No se observaron diferencias en el clivaje, pero en el grupoCEOP-P1 aumento significativamente el porcentaje de blastocistos (control: 14%; CEOP-1 + SFB: 10%; CEOP-1: 28%, chi-cuadrado p