Efecto antiviral de la proteína de la leucemia promielocítica contra distintos virus con genoma de ARN

GIOVANNONI, F; CARRO, AC; JUIZ NATALIA; E DAMONTE; CYBELE C. GARCÍA

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virologia; 2011

SAV

La proteína de la leucemia promielocítica (PML)  forma parte de estructuras subnucleares discretas llamadas cuerpos nucleares o Nuclear Bodies (PML-NBs). En ellas, pueden colocalizar más de 100 proteínas diferentes, ya sea temporalmente o constitutivamente. Esta gran diversidad de moléculas involucra a los PML-NBs en múltiples procesos celulares tales como: apoptosis, regulación de la expresión génica, reparación de ADN y respuesta antiviral. La actividad antiviral de PML ha sido mayormente estudiada en virus con genoma de ADN. En este trabajo, se propuso investigar el rol de PML ante la infección de diferentes virus con genoma de ARN: dengue (DENV), Junín (JUNV) y  Tacaribe (TCRV); siendo los dos primeros agentes etiológicos de fiebres hemorrágicas virales. Para evaluar el efecto antiviral de PML en células A549,  se silenció su expresión mediante siRNAs y se evaluó la producción de partículas virales al ser infectadas con DENV, JUNV o TCRV. Al comparar los títulos de DENV, JUNV y TCRV en células donde PML fue silenciada respecto de células sin silenciar, se encontraron incrementos de 1,5; 0,6 y 0,9 logaritmos respectivamente. A continuación, se estudió por inmunofluorescencia indirecta el efecto de la infección viral sobre la distribución de los PML-NBs. Se observó que la infección con DENV, JUNV y TCRV causó la pérdida del patrón nuclear de PML y al mismo tiempo un aumento de PML en el citoplasma. Estos resultados podrían indicar la existencia de un tráfico o translocación núcleo-citoplasmática de PML durante la infección viral. Por otra parte, las células vecinas a las infectadas con DENV mostraron un aumento en el número y tamaño de los PML-NBs. Este resultado sugiere la posible activación de la vía del interferón, ya que este es un potente inductor de PML. Para determinar cuál de las proteínas de JUNV sería la responsable de mediar la translocación de PML hacia el citoplasma, células A549 se transfectaron con plásmidos que expresan las proteínas de JUNV: NP (nucleoproteína), GPC (precursor de la glicoproteína) y la proteína de matriz Z. La observación por microscopía confocal sugirió que GP-1 o Z serían las responsables de mediar este proceso. A fin de evaluar si el aumento en el número y tamaño de los PML-NBs en células vecinas a aquellas infectadas se correlacionaba con un aumento en los niveles de expresión de PML, realizamos una RT-PCR cuantitativa. Al comparar los niveles de ARNm de PML en células infectadas con respecto de no infectadas, se encontraron incrementos de 6200, 13 y 30 veces para DENV, JUNV y TCRV respectivamente. Estos resultados confirmaron los efectos visualizados previamente por microscopía de fluorescencia. En conclusión, considerando los novedosos resultados obtenidos en este trabajo, y teniendo en cuenta los informados por otros grupos en diferentes sistemas virus-célula, se debería contemplar la potencial significancia terapéutica de PML, ya que podría ayudar en las estrategias de inhibir o inducir perfiles de citoquinas adecuadas en respuesta a los virus reemergentes dengue y Junín causantes de fiebres hemorrágicas en nuestro país.