Inhibición de la multiplicación del virus Junín mediante el uso de RNA interferentes

ARTUSO M.C.; GARCÍA C.C.; DAMONTE E.B.

Huerta Grande, Córdoba, Argentina

Congreso; Primera Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina. IX Jornadas de la Sociedad Argentina de Biología; 2007

Sociedad Argentina de Biología

El virus Junín (JUNV), responsable de la fiebre hemorrágica argentina, posee un genoma RNA simple cadena con estrategia de expresión ambisentido que codifica para cinco proteínas. En trabajos anteriores hemos demostrado que la proteína Z de JUNV es un atractivo blanco para la terapia antiviral. Con el objetivo de estudiar un nuevo mecanismo antiviral alternativo, se utilizaron RNA interferentes dirigidos hacia el mRNA de Z (Z-siRNAs) y se evaluó la acción antiviral de los mismos a nivel de síntesis de mRNA, proteínas y formación de partículas virales. Para ello, se transfectaron células Vero con diferentes Z-siRNAs y luego se infectaron con JUNV. A las 24 h p.i se cosecharon los sobrenadantes para cuantificar el título viral obtenido, y simultáneamente se procesaron las células para extracción de RNA y posterior qRT-PCR. En los resultados se   observó una eficiente inhibición de la replicación viral monitoreada con primers específicos para Z, y una inhibición en la formación de placas en las células que recibieron los Z-siRNAs. Por otro lado, se analizó la expresión de la proteína Z recombinante mediante una inmunofluorescencia indirecta, observándose un reducido número de células que expresan el antígeno viral en células cotransfectadas con Z-siRNAs y el pcDNA-Z. Estos resultados indican que el silenciamiento de Z por siRNAs permite bloquear la multiplicación de JUNV.                                                              Área temática: Biología Molecular y Celular                                Subárea: Microbiología