CISD1, una proteína nuclear de localización mitocondrial, modularía la actividad del Complejo I mitocondrial

TAMINELLI, G.L.; VALDIVIESO, A.G.; PAGANO, E.S.; SANTA COLOMA, T.A.

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

CISD1 (CISDGH iron sulfur domain-1) es una proteína cuya expresión depende del canal de cloruro CFTR. CISD1 fue localizada utilizando microscopía confocal, en mitocondria mediante la expresión de proteínas de fusión CISD1:EGFP en concordancia con la predicción efectuada con el programa PSORT II (http: //psort.nibb.ac.jp/form2.html), aunque no se descarta una posible translocación a núcleo dado el análisis in sílico de la secuencia protéica. (BBRC 365: 856, 2008) Su función aún es desconocida. Aunque se ha reportado que ratones knock out de CISD1 presentan una falla en la fosforilación oxidativa de mitoc. El ARNm de CISD1 está modulado negativamente en células CFDE (provenientes epitelio traqueo-bronquial de un paciente con fibrosis quística) y los niveles son restaurados en células CFDE que expresan ectópicamente CFTR wt (células CFDE/6RepCFTR). Estos resultados fueron ampliamente confirmados mediante FISH confocal, hibridación in situ en cortes de tejidos de pulmón, RT-PCRs semi-cuantitavias y RT-PCR en tiempo real. El tratamiento con glibenclamida (50 M) o CFTR(inh)-172 (5 µM) en células CFDE/6RepCFTR, produjo una reducción en los niveles del ARNm de CISD1. En células CFDE que expresan esta quimera se observaron importantes alteraciones en la estructura de las mitocondrias. Cabe destacar que ha sido imposible seleccionar y mantener en cultivo células CFDE o T84 transfectadas con la quimera CISD1:EGFP, ya que las células en esas condiciones sobreviven muy pocos pasajes. Recientemente, otros autores han demostrado que CISD1 posee un dominio con 3 Cys y 1 His que unen un cluster 2Fe-2S (Wiley y col, PNAS 104:5318, 2007). Con el objeto de estudiar la posible función de CISD1, hemos diseñado una mutante en la cual las cisteínas 72 y 74, que intervienen en la unión al cluster 2Fe-2S, han sido reemplazadas por serinas, con la idea de crear un dominante negativo. Esta construcción fue recientemente transfectada en células CACO2 con el fin de estudiar mediante citometría de flujo los posibles efectos sobre diversas funciones mitocondriales. Agradecimientos: subsidios ANPCyT (PICT 00628), CONICET (PIP) becas del CONICET (ESP y AGV) y UCA.