EFECTOS DEL CANAL DE CLORURO CFTR SOBRE LA ACTIVIDAD MITOCONDRIAL

TEIBER, M.L.; VALDIVIESO, A.G; TAMINELLI, G.L.; MARIN, M.C.; PAGANO, E.S.; SANTA COLOMA, T.A.

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

El gen responsable de la fibrosis quística (FQ) es el CFTR, un transportador de Cl-. En trabajos previos hemos demostrado que la expresión de los genes MTND4 y CISD1 está afectada en FQ (BBRC 356:805, 2007 y BBRC 365: 856, 2008). Como MTND4 es fundamental para la actividad del Complejo I mitocondrial, recientemente estudiamos la actividad de este complejo; la misma se reduce en un 40-50% en células FQ (ver Valdivieso y col). El objetivo de este trabajo fue determinar, por citometría de flujo, si el potencial de membrana mitocondrial y la masa mitocondrial también se encuentran bajo la modulación de la actividad del CFTR. Se utilizaron como modelo células T84 controles y tratadas con inhibidores del CFTR. Para la medición del potencial de membrana mitocondrial se utilizó la señal del dímero de JC-1 (15,3 µM, 20´ de incubación, Ex: 488 nm, Em: 530/585 nm monómero/dímero) que correlaciona con el potencial mitocondrial. Para determinar la masa mitocondrial se midió la unión del colorante fluorescente NAO (10 µM, 20´, Ex: 488 nm, Em: 640 nm) a cardiolipina; con NAO se utilizaron células previamente fijadas con etanol 70 %, con el fin de evitar posibles efectos inespecíficos del potencial de membrana o de un posible transporte diferencial del colorante. Se observó que el potencial de membrana mitocondrial se encontraba ligeramente afectado por la inhibición del CFTR durante 24 horas, con 5 µM de CFTR(inh)-172. Por el contrario, la masa mitocondrial se encontró ligeramente elevada, indicando un leve aumento en el número de mitocondrias como respuesta adaptativa a la inhibición del CFTR. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos, la reducción en la actividad del Complejo I, en células FQ o T84 con la actividad del CFTR inhibida, no puede atribuirse a una reducción en el número de mitocondrias y afectaría levemente el potencial de membrana mitocondrial. Agradecimientos: subsidios UBA (X-156), ANPCyT (PICT 13907), becas del CONICET (MCM, ESP y AGV) y UCA (GLT).