Madurela mycetomatis presenta mutaciones naturales en el gen FKS1 relacionadas con una reducción natural de su sensibilidad a las equinocandinas.

CIMA-CLAVE, MJ; LEONARDELLI, F.; SERRANO, J; GARCIA, G.

Tucuman

Congreso; Título: Emergencia de Aspergillus fumigatus resistentes a los azoles en Argentina Autores: Macedo D, Brito Devoto T, Leonardelli F, Isla G, Cuestas L, Córdoba S, García-Effron* G. Introducción La resistencia de Aspergillus fumigatus a los antifúngicos azó; 2019

SADI

Título:Madurela mycetomatis presenta mutaciones naturales en el gen FKS1 relacionadas con una reducción natural de su sensibilidad a las equinocandinas.Cima-Clave MJ, Leonardelli F, Serrano J, Garcia-Effron G1 Laboratorio de Micología y Diagnóstico Molecular - Cátedra de Parasitología y Micología ? Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas ? Universidad Nacional del Litoral. Santa Fe (Argentina).2 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICET). CCT-Santa Fe (Argentina).3 Hospital Independencia (Santiago del Estero) ? Cátedra de Microbliología ? Fac. de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Santiago del Estero.IntroducciónLos eumicetomas son infecciones fúngicas crónicas caracterizadas por la presencia de masas subcutáneas y fístulas por las que drenan granos de colores. Los agentes de eumicetomas de grano negro pertenecen a dos órdenes fúngicos llamados Sodariales y Pleosporales. Los agentes de estos órdenes más comúnmente aislados a nivel mundial son Madurella mycetomatis (Sordarial), Trematosphaeria grisea (Madurella grisea) y Nigrograna mackinonii (ambos Pleosporales). La sensibilidad de estos hongos a los antifúngicos es desconocida y difícil de evaluar ya que no generan elementos de fructificación. Además, las secuencias de los genes blanco de antifúngicos de estos hongos no se conocen impidiendo anticipar relaciones feno/genotípicas que permitan inferir su sensibilidad.ObjetivosClonar y caracterizar el gen blanco de las equinocandinas de M. mycetomatis (llamado FKS1). Estudiar sus secuencias y establecer la relación genotipo/fenotipo de la sensibilidad a las equinocandinas utilizando una cepa de Saccharomyces cerevisiae con un gen FKS1 híbrido que incluye la región hot spot 1 de M. mycetomatis. Material y métodos.Se obtuvo DNA de una cepa control de M. mycetomatis (CBS) por el método fenol cloroformo. Se amplificó una porción del gen FKS1 utilizando primers degenerados. Se clonó el fragmento en plásmidos comerciales (P-GemT easy vector) y se secuenció utilizando primers universales. Esta secuencia fue utilizada para generar un FKS1 quimérico que presentaba los extremos 5´ y 3´ de S. cerevisiae y la región hot spot 1 de M. mycetomatis. Esta construcción se transformó utilizando acetato de litio en una cepa de S. cerevisiae de nuestro laboratorio (S. cerevisiae BY4742) que presenta el gen FKS1 delecionado con el cassette URA3. Esta cepa es hipersensible a equincandinas y sensible a FK506. La sensibilidad a caspofungina y anidulafungina fue evaluada en las cepas transformante y parentales de S. cerevisiae utilizando el protocolo M27 4ta edición de CLSI.ResultadosLa secuencia hot spot 1 de M. mycetomatis fue traducida como YLTLSIRDP. Esta secuencia de aminoácidos presentó diferencias con las secuencias de especies sensibles a las equinocandinas por ej. C. albicans (FLTLSLRDP). La cepa transformante quimérica de S. cerevisiae mostró un aumento de 32 veces la CIM a caspofungina y anidulafungina cuando se la comparó con la cepa parental S. cerevisiae BY4742 (0,50 µg/ml y 0.015 µg/ml, respectivamente). ConclusionesPodemos concluir que el hot spot 1 de Fks1p M. mycetomatis es suficiente y necesario para explicar la reducción en la sensibilidad a las equinocandinas observada en la cepa quimérica obtenida. El cambio en el primer aminoácido del hot spot 1 (tirosina por fenilalanina) fue implicado en resistencias primarias y secundarias a las equinocandinas en especies fúngicas diversas, que van desde levaduras del género Candida hasta hongos filamentosos como Fusarium spp., Scedosporium spp. y Aspergillus fumigatus. A pesar de que no hemos encontrado datos sobre tratamientos de micetomas con equinocandinas, nuestros resultados anticiparían la ineficacia de estas drogas frente a M. mycetomatis.