INVESTIGADORES
GALLO CALDERON Marina Beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN POR RT-PCR Y RFLP, DE CANINE DISTEMPER VIRUS (CDV) EN PERROS DE LA CIUDAD DE BUENOS AIRES.
Autor/es:
M. GALLO CALDERÓN; P. REMORINI; M IGLESIAS; J.LA TORRE.
Lugar:
Vaquerias, Cordoba
Reunión:
Otro; XXIV Reunión Científica Anual SAV; 2004
Institución organizadora:
Sociadad Argentina de Virologia
Resumen:
INTRODUCCIÓN: el Canine Distemper Virus, miembro del género Morbillivirus, familia Paramyxoviridae, es altamente contagioso y de distribución mundial. La enfermedad, fue controlada con la utilización de vacunas atenuadas, pero recientemente aumentó el número de casos en nuestro país. El CDV induce inmunosupresión y una enfermedad sistémica generalmente fatal.
Las técnicas de diagnóstico más ampliamente utilizadas son: inmunofluorescencia, ELISA, e inmunohistoquimica, pero éstas no proporcionan un resultado rápido, y pueden resultar negativas para animales con una enfermedad crónica o subaguda.
OBJETIVO: obtener un método diagnóstico rápido y preciso para CDV. Diferenciar los aislamientos de campo de las cepas vacunales.
MATERIALES Y METODOS: el ARN de muestras de sangre, se extrajo con Trizolâ.
Se amplificó por RT-PCR un fragmento de 287 pares de bases (pb) del gen de la Nucleoproteina (NP) que es una región conservada del genoma viral y un fragmento de 871 pb del gen de la hemaglutinina (H), región variable del genoma.
El ADN purificado a partir del fragmento de 871 pb, fue digerido con la enzima de restricción NdeI.
RESULTADOS: de 98 muestras, un 72% presentó amplificación positiva para la NP, mediante la técnica de RT-PCR.
El límite de detección fue de 35 partículas virales para la NP.
Algunas de las muestras positivas para la NP fueron evaluadas para la H.
Como la endonucleasa NdeI no tiene un sitio de reconocimiento en el gen H de las cepas vacunales y sí lo tiene en los aislamientos de campo, la técnica RFLP permite una clara diferenciación entre las mismas.
CONCLUSIONES: la metodología utilizada, permite diferenciar las cepas vacunales respecto de las cepas salvajes y es una primera aproximación al estudio de la relación filogenética que existe entre las mismas.
