La activación de Nrf2 por el Compuesto A (CpdA) protege a las células-β de la injuria inflamatoria mediada por citoquinas

ANDREONE, L; SETULA, C; ASSAD, JM; PERONE, MJ

Congreso; XXII Congreso Argentino & 1° Congreso Virtual de Diabetes; 2020

La activación de Nrf2por el Compuesto A (CpdA) protege a las células-b de la injuria inflamatoria mediada por citoquinas.Luz Andreone, Carolina Setula, Juan Manuel Assad, Marcelo Javier Perone.Laboratorio de Inmuno-Endocrinología,Diabetes y Metabolismo, Instituto de Investigaciones en Medicina Traslacional(IIMT - CONICET - Univ. Austral), Pilar, Argentina.Introducción: El desarrollo del proceso autoinmune durante la diabetes tipo 1 (DM1)contribuye a la insulitis; en este contexto, el estrés de las células-β y su posterior deficiencia en la secreción deinsulina preceden a los signos clínicos de la enfermedad. La hiperglucemia desencadena la producción de especies reactivas de oxígeno(ROS) mitocondriales que superan la capacidad antioxidante de las células-β conduciendoal estrés oxidativo. El microambiente inflamatorio del islote contribuye a laactivación del estrés oxidativo y de retículo endoplásmico (RE) resultando en ladisfunción y muerte de las células-β. El factor de transcripción Nrf2 regula la expresión degenes citoprotectores en respuesta al estrés oxidativo, su inducción esnecesaria para la fisiología normal de la célula-β. Hemos reportado que el CpdA regula células inmunes clave en larespuesta inmune e inflamatoria y en la insulitis, linfocitos T y células dendríticas.También, observamos que el CpdA disminuye el estrés de RE inducido porcitoquinas inflamatorias (IL-1b+IFN-g; CYT) en células-β y que la administración in vivo del CpdA retarda la aparición dehiperglucemia en un modelo murino de diabetes autoinmune. El desarrollo de nuevos agentes con acciónanti-inflamatoria e inmunomoduladora y potencial protector dirigidoa la señalización disfuncional de las células-β posee interés clínico en la diabetes.Objetivos: Explorar el efecto delCpdA sobre la vía de señalización de Nrf2 y el estrés oxidativo inducido por CYT en las células-β.Materiales y Métodos: Comomodelo experimental utilizamos la línea celular de insulinoma de rata (INS-1E).Fórmula química del CpdA: cloruro de2-(4-acetoxifenil)-2-cloro-N-metil-etilamonio. Se utilizó un plásmido reportero(ARE-LUC) para la evaluación de la actividad transcripcional de Nrf2 (luminometría);RT-qPCR (Sybr Green) para el análisis de la expresión de ARNm; WB para elanálisis de la expresión de proteínas; kit comercial basado en DCFDA para evaluar ROS(fluorometría); análisis de viabilidad celular por MTT y ELISA para insulina.Resultados: El CpdA (10μM) estimuló la actividad transcripcional de Nrf2 induciendola expresión del ARNm de enzimas antioxidantes (NQO1, HMOX-1 y Txnrd1) en células INS-1E(p<0.05 vs. control). Consecuentemente, el CpdA redujo la generación de ROS inducida porCYT (p<0.01 vs. control).La acción del CpdA contrarrestó el aumento del índice apoptótico, cuantificadomediante la relación de la expresión de Bax/Bcl-2, y de la expresión delARNm de DP5 (death protein-5), ambosparámetros inducidos por CYT (p<0.05 vs. control). El CpdA protegió a las células INS-1E de lareducción de la viabilidad inducida por CYT y mantuvo la secreción basal de insulina (p<0.05 vs. control).Conclusiones: El tratamiento con CpdA activa la vía de Nrf2 disminuyendo el estrés oxidativo y laapoptosis celular y manteniendo la secreción basal normal de insulina cuandolas células-β son expuestas in vitroa un entorno inflamatorio inducido por CYT. Actualmente, diversos experimentos continúanen curso en nuestro laboratorio para dilucidar el potencial terapéutico delCpdA en la diabetes autoinmune.<!-- /* Font Definitions */@font-face{font-family:Arial;panose-1:2 11 6 4 2 2 2 2 2 4;mso-font-charset:0;mso-generic-font-family:auto;mso-font-pitch:variable;mso-font-signature:3 0 0 0 1 0;}@font-face{font-family:"ＭＳ 明朝";panose-1:0 0 0 0 0 0 0 0 0 0;mso-font-charset:128;mso-generic-font-family:roman;mso-font-format:other;mso-font-pitch:fixed;mso-font-signature:1 134676480 16 0 131072 0;}@font-face{font-family:"ＭＳ 明朝";panose-1:0 0 0 0 0 0 0 0 0 0;mso-font-charset:128;mso-generic-font-family:roman;mso-font-format:other;mso-font-pitch:fixed;mso-font-signature:1 134676480 16 0 131072 0;}@font-face{font-family:Calibri;panose-1:2 15 5 2 2 2 4 3 2 4;mso-font-charset:0;mso-generic-font-family:auto;mso-font-pitch:variable;mso-font-signature:3 0 0 0 1 0;} /* Style Definitions */p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal{mso-style-unhide:no;mso-style-qformat:yes;mso-style-parent:"";margin:0cm;margin-bottom:.0001pt;mso-pagination:widow-orphan;font-size:12.0pt;font-family:"Times New Roman";mso-fareast-font-family:"ＭＳ 明朝";mso-fareast-theme-font:minor-fareast;mso-bidi-font-family:"Times New Roman";mso-ansi-language:ES-TRAD;mso-fareast-language:ES-TRAD;}.MsoChpDefault{mso-style-type:export-only;mso-default-props:yes;font-family:Cambria;mso-ascii-font-family:Cambria;mso-ascii-theme-font:minor-latin;mso-fareast-font-family:"ＭＳ 明朝";mso-fareast-theme-font:minor-fareast;mso-hansi-font-family:Cambria;mso-hansi-theme-font:minor-latin;mso-bidi-font-family:"Times New Roman";mso-bidi-theme-font:minor-bidi;mso-ansi-language:ES-TRAD;}size:595.0pt 842.0pt;margin:2.0cm 2.0cm 2.0cm 2.0cm;mso-header-margin:35.45pt;mso-footer-margin:35.45pt;mso-paper-source:0;}div.WordSection1{page:WordSection1;}