PERFIL PROTEÓMICO DE LA GERMINACIÓN DE EJES EMBRIONALES DE SOJA.

PEROTTI, V.E.; GOSPARINI, C.; MARGARIT, E.; MONTECCHIARINI, N.; PALMIERI, R.

Rosario

Congreso; XXI Congreso y XXXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2019

SOCIEDADES DE BIOLOGÍA DE ROSARIO

La germinación de las semillas está estrictamente regulada para garantizar el éxito del establecimiento del nuevo individuo y es definida como el reinicio del crecimiento del eje embrional. Los ejes embrionales aislados de semillas de soja [Glycine max (L. Merr)] son capaces de germinar autónomamente luego de 12 h de incubación en agua. En años recientes se describió, a nivel transcriptómico, la activación metabólica del eje embrional de soja durante la germinación. En cuanto al perfil proteómico, 764 proteínas fueron identificadas en la germinación de semillas de soja completas, la mayor parte de la cuales se encontró vinculada al metabolismo de movilización de reservas. Este último es considerado un evento pos germinativo que tiene lugar preferentemente en los cotiledones de estas semillas, los cuales cumplen un rol secundario en la germinación propiamente dicha. El objetivo del presente trabajo fue describir el perfil proteómico de ejes embrionales de soja germinados, siendo éste el principal órgano responsable en definir la germinación. Ejes embrionales de semillas de soja se incubaron en agua destilada a 27 ± 1 ºC y oscuridad. Luego de 12 h de incubación, los ejes germinados se pesaron para obtener muestras de 1 g de tejido fresco. La muestra se pulverizó en N2 líquido y se sometió a un protocolo de purificación de proteínas de pared celular en buffer 5 mM NaAc pH 4,6; conteniendo gradientes (0,4 ? 1) M de sacarosa, seguido de extracción en 0,2 M CaCl2 y precipitación final en TCA 100 %. La identificación de proteínas (CEQUIBIEM) se realizó por Espectrometría de masa (MS y MS-MS) utilizando las bases de datos disponibles en Uniprot y Phytozome para asignar los péptidos obtenidos. Se identificaron 2677 proteínas únicas de soja con al menos dos péptidos de alta confianza, correspondientes a diferentes fracciones subcelulares. Estas se utilizaron para buscar sus ortólogos de A. thaliana. Se encontraron 2147 genes únicos de A. thaliana, los cuales fueron clasificados por ontología génica (Gene Ontology, GO) disponible en AgriGO. Este estudio mostró un enriquecimiento en proteínas asociadas a procesos biológicos relacionados al desarrollo de estructuras anatómicas (453), ciclo celular (134), regulación de la expresión génica (94), biosíntesis (742) y catabolismo (286), metabolismo primario y secundario (1150 y 144); transporte (429), comunicación (85) y respuesta a distintos tipos de estímulos (715), entre otros procesos. Además, se encontró que las proteínas estaban relacionadas con funciones moleculares como transporte (198), unión (1087), actividad kinasa (183), actividad motora (19) y receptora (23), y con un enriquecimiento en proteínas de localización nuclear (756). En líneas generales, el perfil proteómico del eje embrional germinado mostró múltiples procesos actuantes, observándose una extensiva activación metabólica y de mecanismos de señalización, comunicación y transducción de señales, los cuales estarían afectando la expresión génica y gatillando el desarrollo y establecimiento de estructuras anatómicas. Estos resultados evidencian una gran actividad celular responsable del crecimiento de los ejes embrionales de soja durante la germinación, confirmando la importancia de evaluar este órgano blanco a fin de obtener un análisis más profundo y claro del proceso.