Análisis de la N- y O-glicosilación de una muteína del interferón alfa-2 humano recombinante

CEAGLIO, NATALIA; ETCHEVERRIGARAY, MARINA; CONRADT, HARALD; KRATJE, RICARDO; OGGERO EBERHARDT, MARCOS

Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Argentina

Jornada; Jornada 2009 de la Academia Nacional de Farmacia y Bioquímica: “Herramientas modernas para el estudio de aspectos estructurales de proteínas”; 2009

Academia Nacional de Farmacia y Bioquímica

El interferón alfa humano constituye una familia de citoquinas con un amplio espectro de funciones biológicas, lo que determina su empleo como fármaco para el tratamiento de numerosas enfermedades virales y tumorales. No obstante, su principal desventaja como agente terapéutico radica en su rápida eliminación sistémica. Con el fin de mejorar sus propiedades farmacocinéticas, se realizaron mutaciones sobre su estructura primaria, obteniéndose una muteína con cuatro sitios potenciales de N-glicosilación (IFN-4N) en células CHO. Los oligosacáridos de tipo N liberados mediante tratamiento enzimático fueron analizados utilizando HPAEC-PAD en condiciones nativas. Los patrones de elución fueron consistentes con estructuras glicosídicas complejas mayoritariamente trisialidadas (28%) y tetrasialidadas (39%) con o sin repeticiones de N-acetil lactosamina. El análisis de los oligosacáridos neutros demostró la presencia de estructuras principalmente tri- y tetra-antenarias (31% y 57%, respectivamente), corroborándose dicho resultado mediante MALDI-TOF-MS. Por otra parte, se observó la presencia del disacárido GalNAc-Gal-(NeuAc)2 unido mediante un enlace de tipo O a la Thr106 en el 90% de las moléculas. Estudios conformacionales utilizando dicroísmo circular no demostraron diferencias en la estructura secundaria (UV lejano) del IFN-4N con respecto a la citoquina no glicosilada, aunque las bandas en el espectro UV cercano (estructura terciaria) difirieron en su intensidad. Por otra parte, la variante hiperglicosilada exhibió una mayor estabilidad térmica en ensayos de microcalorimetría DSC