Caracterización in silico de regions promotoras de genes que codifican para rafinosas sintasas de frutos carnosos

FERREYRA L.; BUSTAMANTE C.; MULLER G.; GISMONDI M.; DRINCOVICH M.F.

ROSARIO

Jornada; XIV Jornadas de Ciencias, Tecnologías e Innovación UNR; 2020

Universidad Nacional de Rosario

El durazno (Prunus persica) y el tomate (Solanum lycopersicum) son frutos que se deterioran a temperatura ambiente, por lo que es necesario el uso de bajas temperaturas durante el transporte y almacenaje para prolongar su vida media. Sin embargo, esto lleva a problemas fisiológicos denominados daños por frío (chilling injury, CI). Por este motivo, se pretende dilucidar los mecanismos moleculares de este daño profundizando en el estudio de genes que codifican para rafinosa sintasas (RSs), ya que se observó un aumento de la expresión del gen PpRS (ppa001744m) y del contenido de rafinosa en frutos de durazno expuestos al frío prolongado (Bustamante y col 2016). Además, se propone estudiar los genes RS de tomate utilizado como sistema heterólogo de frutos carnosos. Se compararon las secuencias promotoras (2000 pb corriente arriba del ATG) de los genes RS de durazno y tomate (Solyc02g086530 y Solyc03g112500) mediante el programa cisAnalyzer (Gismondi y col 2020) en busca de motivos de respuesta al frío. Los genes RS de tomate se eligieron en base al previo análisis de estas secuencias mediante UniProt, y con las secuencias proteicas se armó un árbol filogenético usando Meg-Align (Lasergene). Las secuencias proteicas putativas comparadas fueron: Seed Inhibition Proteins (SIPs) de S. lycopersicum y Arabidopsis thaliana, RSs de P. persica, A. thaliana y Cucumis sativus, y Galactinol Sintasa de P. persica. En todas las secuencias promotoras hay entre un 43 y 47% de motivos relacionados al estímulo por frío. Se encontró en todas las secuencias el elemento en cis C-repeat (CRT)/dehydration-responsive element (DRE), conocido por tener funcionalidad ante bajas temperaturas (Maruyama y col 2012), el ARR5/7/BS, secuencia conservada en los promotores de CBF2 y ZAT12 en A. thaliana (Doherty y col 2009) y GT-1BS, importante motivo en la regulación por frío en A. thaliana (Lindölf y col 2009). Además, se encontraron los motivos PpNovel y PpNovelI, elementos en cis inducibles por frío en P. persica (Titarelli y col 2009), en los promotores PpRS y Solyc02g086530. El alto número de motivos de respuesta al frío encontrados concuerda con la inducción del transcripto PpRS frente al frío prolongado. Además, todos los promotores comparten motivos, sugiriendo que las RSs de tomate responderían a las bajas temperaturas, lo cual se comprobará mediante estudios de qRT-PCR.