Efecto del origen genético sobre el fenotipo de los animales knock out para CRISP1

WEIGEL MUÑOZ M; BRUCKMAN NG; BATTISTONE A; VASEN G; ERNESTO JI; DA ROS VG; MALDERA JA; COHEN D. J.; CUASNICU P

Congreso; XXIII Reunión Bienal Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana (ALIRH); 2013

  Una de las moléculas propuestas como mediadoras del proceso de fertilización es la proteína epididimaria CRISP1, descripta por nuestro grupo y primer miembro de la familia CRISP (Cystein Rich Secretory Proteins). Con el fin de estudiar la relevancia de CRISP1 para la fertilidad, nuestro laboratorio generó ratones knock out (KO) para esta proteína, los cuales, si bien fértiles, presentaron espermatozoides con menores niveles de AMPc, fosforilación en tirosina y fertilización in vitro. Considerando que una mutación puede producir diferentes fenotipos dependiendo del origen genético de los animales, el objetivo del presente proyecto consistió en estudiar el fenotipo de animales KO para CRISP1 que exhiban un diferente fondo genético. Para tal fin, los animales KO con un origen genético híbrido 129/C57/BL6 fueron sometidos a 7 ciclos de retrocruza con animales C57/BL6 a lo largo de dos años, hasta la obtención de animales KO con una base genética prácticamente homogénea (99.2%) para la cepa C57BL/6. El análisis de la fertilidad de estos animales reveló un fenotipo diferente al de la colonia híbrida original a juzgar por el hecho de que el tiempo transcurrido desde el inicio del apareo hasta el parto fue significativamente mayor para hembras apareadas con machos KO que heterocigotas (HT) y que los machos KO presentaron una menor capacidad fertilizante in vivo. Asimismo, a diferencia de lo observado para la colonia original, los espermatozoides provenientes de animales KO de la nueva colonia presentaron niveles de motilidad y reacción acrosomal inducida por progesterona (15 uM) significativamente menores a los de los animales HT. La bajada en motilidad fue revertida por el agregado de dibutiril AMPc e IBMX (3-isobutil-1-metil-xantina) durante la capacitación, sugiriendo que dicha bajada sería debida a los menores niveles de AMPc de los espermatozoides KO. En conjunto, los animales de la nueva colonia presentaron un fenotipo diferente al de la colonia inicial, revelando su relevancia tanto para la fertilidad como para la motilidad y reacción acrosomal de los espermatozoides,  confirmando así a CRISP1 como otro ejemplo de la influencia del origen genético sobre el fenotipo de los animales. Estos estudios apoyan la importancia de caracterizar los diferentes fenotipos reproductivos generados por una mutación en varios fondos genéticos, con el fin de mejorar el desarrollo de métodos tanto de diagnóstico como de tratamiento de la infertilidad