PURIFICACION Y CARACTERIZACION DE UNA SERIN-PROTEASA TIPO SUBTILISINA INDUCIDA DURANTE LA SENESCENCIA FOLIAR EN TRIGO

ROBERTS, IRMA; FERNANDEZ MURRAY, PEDRO; CAPUTO, CARLA; PASSERON, MARÍA SUSANA; BARNEIX, ATILIO; CARLA PAULA CAPUTO SUAREZ

Punta del Este

Congreso; REUNION LATINOAMERICANA DE FISIOLOGIA VEGETAL; 2002

Se purificó una nueva actividad proteásica a partir de hojas de trigo inducidas a senescencia por mantenimiento en oscuridad durante 72 horas. Esta actividad solo se manifiesta en hojas senescentes y contribuye en más de un 50% a la actividad proteolítica total. La purificación se realizó por precipitación con sulfato de amonio, cromatografía de intercambio iónico en DEAE-Sepharosa y Q-Sepharosa y cromatografía de filtración en Sephacryl S200. La enzima hidroliza el péptido sintético Succ-AAPFpNA, un sustrato específico de la actividad de quimotripsina, con una Km de 1.18 mM y una Vmax de 2.27 mmoles pNA mg-1 h-1. La máxima actividad se obtuvo a pH superiores a 8 y la enzima resultó estable hasta 60 ºC. La inhibición de la actividad por quimostatina apoya la idea de que se trata de una actividad de tipo quimotripsina en concordancia con lo sugerido por su capacidad de degradar Succ-AAPFpNA. La enzima también resultó inhibida por PMSF pero no por E-64, sugiriendo que pertenecería a la familia de las serín-proteasas. En coincidencia con este resultado el análisis de una secuencia parcial de 17 aminoácidos de la proteasa purificada mostró altos niveles de similitud (65-75% de identidad) con varias serín-proteasas tipo subtilisina de distintas especies vegetales.