ROL DE TGF-β1, pERK Y T3 EN MODELOS DE HEPATOCARCINOGÉNESIS IN VIVO E IN VITRO

DEZA, Z; ALVAREZ, L; ROMERO-CAÍMI, G; MIRET, N; ESPAÑOL, A; SALES, M; CALVO, G; SAENZ, D; DI VENOSA, G; RIDRUEJO, E

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; XX Congreso Argentino de Hepatología; 2019

Asociación Argentina para el estudio de las Enfermedades del Hígado

Introducción: El hepatocarcinoma (HCC) es eltumor de hígado más frecuente. Se sugiere que ladesregulación endocrina sería un importante proceso inicial para lashepatocarcinogenesis.  Previamentedemostramos que en un modelo de inducción/promoción (I/P) tumoral hepatico y enla línea celular Hep-G2 se desregula el crecimiento celular y aumenta larelación proliferación/apoptosis celular. Objetivo:Nuestro objetivofue evaluar el mecanismo molecular de acción y las moléculas claves que sedesregulan en la homeostasis celular en estadios pre-neoplásicos utilizando elHexaclorobenceno (HCB) como promotor tumoral y disruptor endocrino.Dado que el HCB desregula elcrecimiento celular en un modelo I/P [dietilnitrosamina(DEN)(100mg/kg)/HCB(100mg/kg)] en hígado de rata evaluaremos: a) PCNA(Westernblot, W); b) TGF-β1 (RT-PCR), W) y c) concentracion tisular de T4 y T3 (RIA).Dado que el HCB altera la proliferacionen la línea celular Hep-G2 evaluaremos: a) el rol  de pERK (W), de TGF-β1 (W, RT-PCR) y de T3,en el efecto del HCB (5µM) sobre PCNA. Se utilizaran inhibidores especificos (ay b) y T3 exogena (10-7M) en c.Tenendo en cuenta que el desarrollodel tumor requiere vascularizacion, se evaluara: a) en la linea celular Hep-G2 la liberacion de H2S (vasodilatador) al medio de cultivo deHep-G2 tratadas con HCB; b) en ratones nude tratados con HCB (0,3 y 3mg/kg) einoculados con Hep-G2  laneo-angiogénesis en la piel; c) en la línea vascular Ae-hy 296  el efecto del medio condicionado (MC)obtenido del cultivo de Hep-G2 con HCB (5µM) sobre: a) PCNA y migracióncelular; b) rol de la kinasa pERK al tratar las celulas Ae-hy 296 con HCB, seutilizara inhibidor especifico de pERK,  PD98059.Resultados: En el modelo I/P aumentó PCNA(33%,p<0,01), TGF-β1 (32%, p<0,01)  ydisminuyo T3 (29%, p<0,01). En Hep-G2, aumento PCNA (25%, p<0,01) y H2S(30%,p<0,001). Los niveles de  PCNA novariaron con HCB/T3 (10-7M) o HCB/Inh TGF-β1. En las células Ae-hy 296 aumentoPCNA  y la migración celular con MC deHepG2/HCB  (31%,p<0,01,  26%, p<0,05). Ambos parametros no variaronal pretratar a las  células con PD98059. PCNA no varió con HCB/T3(10-7M) o HCB/InhTGF-β1. En ratones aumento la vascularización (32%, p<0,01) con HCB (0,3 mgkg). Conclusión: En los modelos dehepatocarcinogénesis  in vitro , losinhibidores de TGF-β1 y pERK o   T3exogena revierten los estímulos proliferativos y de migración celularpromovidos por el HCB, demostrando su rol critico en este proceso.