Reposicionamiento de blancos moleculares como estrategia para la búsqueda de nuevos agentes terapéuticos contra la toxoplasmosis

ALBERCA L.; DIETRICH, R.C.; CARAM F.; GANUZA A.; GAVERNET, L.; TALEVI A.

CABA

Congreso; XXXII Congreso Argentino de Química; 2019

Asociación Química Argentina

IntroducciónLa toxoplasmosis es una enfermedad infecciosa causada por el parásito protozoarioToxoplasma gondii. La infección puede contraerse a través de la ingesta de carnecruda o poco cocida, leche sin pasteurizar, transplante de órganos, transfusión desangre, por transmisión vertical, por contacto directo con las heces de felinosinfectados o incluso por ingesta de oocistos esporulados en agua o comida [1]. Elreposicionamiento de blancos moleculares (target repurposing) implica evaluarcompuestos con probada actividad sobre determinado blanco molecular (humano ono) en ortólogos de otra especie [2, 3]. Esta aproximación ha despertado particularinterés en el campo de las enfermedades infecciosas y, en particular, de lasenfermedades desatendidas.Recientemente reportamos la actividad tripanocida de cisaprida (proquinético),cinarizina (anti-cinetosis) y paroxetina (antidepresivo), verificando que estas tresdrogas inhiben la captación de putrescina en Trypanosoma cruzi [4-6]. Considerandoque T. gondii es auxótrofo para poliaminas [7], en el presente trabajo evaluamos elefecto de estos compuestos en el agente etiológico de la toxoplasmosis.Materiales y métodosPara la puesta a punto del ensayo de citotoxicidad de las drogas sobre las célulashospedadoras, se incubaron fibroblastos humanos (células hTERT) en placas de 96pocillos durante 24 hs y luego se cambió el medio con otro conteniendo las distintasdrogas en las siguientes concentraciones: 0 (DMSO); 195 nM; 390 nM; 781 nM; 1,562μM; 3,125 μM; 6,25 μM; 12,5 μM; 25 μM y 50 μM. Las células se incubaron durante 96hs en condiciones estándares de cultivo y la citotoxicidad se determinó mediante reducción del bromuro de 3 (4,5 dimetil-2-tiazoil)-2,5-difeniltetrazólico (MTT),leyéndose la absorbancia a 570 nm.Para el ensayo con parásitos, se crecieron fibroblastos en placas de 96 pocillosdurante 24 hs y luego se agregaron 4.000 parásitos fluorescentes (expresan laproteína fluorescente roja) por pocillo. Luego de 4 hs, se incubaron los parásitos enpresencia de las drogas (0 (DMSO); 195 nM; 390 nM; 781 nM; 1,562 μM; 3,125 μM y6,25 μM) durante 4 días en condiciones estándar de cultivo y 96 hs post-infección semidieron los valores de fluorescencia (excitación 544 nm y emisión 590 nm) desdeabajo de la placa utilizando un lector de placas BioTek Synergy. Los datos seexpresaron como porcentaje de fluorescencia respecto del control con DMSO (100%fluorescencia) y se analizaron utilizando el software GraphPad Prism 6.0.ResultadosEn el caso de cinarizina, no fue posible observar un efecto sobre T. gondii dependientede la concentración a las concentraciones ensayadas. No obstante, se observó unefecto antitoxoplasmático concentración-dependiente tanto para cisaprida (IC50 = 5,9μM, Intervalo de confianza 95%: 2,986 - 11,75 μM) como para paroxetina (IC50 = 2,4μM, Intervalo de confianza 95%: 1,784 - 3,281 μM). En el caso de paroxetina, seestimó un índice de selectividad (con respecto a la célula hospedadora) similar a 5,mientras que en el caso de cisaprida el índice de selectividad estimado fue >8(ausencia de efecto citotóxico significativo en la célula hospedadora a concentración50 μM).ConclusionesHemos aportado evidencia de la aplicabilidad del reposicionamiento de blancosmoleculares para identificar potenciales nuevos tratamientos contra la toxoplasmosis.Tanto paroxetina como cisaprida demostraron actividad antitoxoplasmáticadependiente de la concentración; en particular, considerando la selectividad, cisapridaparece tener mejor perfil de seguridad, erigiéndose como un potencial nuevotratamiento seguro contra la toxoplasmosis.