HEMOFILIA A (HA) Y B (HB) EN ARGENTINA: ALGORITMO INTEGRADO PARA EL ANÁLISIS MOLECULAR DE LOS GENES DEL FACTOR VIII (F8) Y IX (F9) HUMANOS.

ROSSETTI LC, RADIC CP, CANDELA M, PÉREZ BIANCO R, DE TEZANOS PINTO M, LARRIPA IB, DE BRASI CD.

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; LI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Las HA y HB son coagulopatías ligadas al sexo, causadas por mutaciones en el F8 y F9. Entre ellas, las grandes inversiones del intrón 22 (Inv22) y del intrón 1 (Inv1) están involucradas en la mitad de las HA severas. Tanto en HA como en HB, el resto de las mutaciones causales en todo el rango de severidad, incluyen grandes y pequeñas deleciones e inserciones, defectos missense, nonsense, y del splicing. El objetivo del trabajo es presentar un protocolo óptimo de análisis molecular de mutaciones causales de hemofilia, adaptado a nuestro país. En HA severa primero se investiga la Inv22 por PCR-inversa, método desarrollado por nosotros en reemplazo del Southern blot y los basados en PCR-larga distancia (LD-PCR); en los casos Inv22 negativos, la Inv1, por doble-PCR. En los restantes casos (HA y HB, severa, moderada y leve), se aborda el estudio de grandes rearreglos (deleciones o inserciones) en probandos (hemicigotas) por análisis de PCR exón-específica y luego LD-PCR para obtener una señal positiva detectable en heterocigotas. El screening de mutaciones pequeñas se realiza por análisis de heterodúplex mediante CSGE de alta resolución y secuenciación de DNA. Asimismo, se aplican los criterios de asignación de causalidad al cambio observado. En cada familia, la simplificación del diagnóstico de la mutación pequeña se aborda por CSGE de menor resolución, o por cambios específicos del patrón de restricción. Este protocolo permitió caracterizar más de 200 individuos de 64 familias con HA y 9 con HB. En HA se encontraron 30 (43%) casos con la Inv22 y 1 con la Inv1; 10 (14%) con grandes deleciones; 13 (19%) pequeñas Ins/Del; 5 (7%) de defectos missense, 4 (5%) nonsense y 1 del splicing. En HB, se observó 1 pequeña deleción, 5 defectos missense, 3 nonsense y un polimorfismo neutral (Malmö). Este algoritmo permite identificar el defecto causal en virtualmente todas las familias afectadas, y proveer información segura para el asesoramiento genético y para el diseño terapéutico.