Bioensayos de toxicidad en complejos de lapachol empleando como modelo biológico al nematodo Caenorhabditis elegans

BRITOS, M. LUCIANA; KRONBERG, FLORENCIA; MUNARRIZ, ELIANA; AUDISIO, M. CARINA

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología; 2019

El lapachol (HLap) se extrae de la madera del árbol conocido como lapacho rosado (Tabebuia avellanedae); es una naftoquinona de fórmula: 2-hidroxi-3-(3-metil-2-butenil)-1,4-naftoquinona con características farmacofóricas, muy usado en medicina alternativa. Presenta toxicidad o efectos colaterales en concentraciones altas, por lo que se han sintetizados compuestos de coordinación con metales de transición (Zn, Mn) y el HLap, como ligando principal, para intentar contrarrestar esa situación. Estos compuestos presentaron un fuerte efecto anti-Staphylococcus aureus. El objetivo de este trabajo fue evaluar la toxicidad de dichos complejos de coordinación empleando el modelo del nematodo C. elegans.Se estudió la toxicidad de los complejos lapachol-Mn y lapachol-Zn en diferentes concentraciones (60, 30 ppm) y del lapachol (sin coordinar) en el porcentaje que se encuentra en cada complejo. Se utilizó dimetilformamida (DMF) como solvente y vancomicina (5 ppm), como control positivo de inhibición de cepas de S. aureus resistente a meticilina. Se evaluó la toxicidad con el bioensayo en medio líquido y la cepa utilizada fue C. elegans N2 var. Bristol. Los nematodos crecieron en agar NGM según técnicas estandarizadas; se utilizó la cepa E. coli OP50-1 como fuente de alimento. Se mezcló 400 µL de las soluciones en buffer M9 con 50 µL de E. coli OP50-1 en cada pocillo de una microplaca de 24 pocillos (por cuadruplicado). Se agregó DMF a cada pocillo para que todos tengan la misma concentración final de DMF. Se transfirieron 20 nematodos en estadio L1 a cada pocillo con 50 µL del buffer M9. Se incubó a 20 °C durante 96 horas. Se detuvo el ensayo por incubación en estufa (10 min a 80 °C) y se agregaron 0,25 mL de solución de Rosa Bengala 0,5 g/L para teñir los gusanos y facilitar el recuento. Se almacenaron los ensayos a 4 °C hasta su medición. Se determinó: Reproducción (número de gusanos testados y su descendencia); Crecimiento (longitud del cuerpo de los nematodos) y Fertilidad (porcentaje de grávidos ( 1 huevo dentro del cuerpo)).Se observó que la reproducción no se vio afectada con respecto al solvente DMF, salvo cuando se usó 60 ppm de los complejos de Zn y Mn. Al analizar el crecimiento solo se detectaron diferencia significativa con el solvente DMF cuando se los trata con 60 ppm del complejo de Zn y de Mn y con el lapachol puro a 54 ppm. Sin embargo, la fertilidad no se vio afectada luego de tratar los nematodos. La longitud media final de los animales estuvo dentro de valores normales (1500 ± 30 μm), y la fertilidad en las distintas muestras analizadas fue ≥ 98%; se observó que en su gran mayoría todos los animales eran grávidos, por lo que los complejos y el lapachol no afectarían el desarrollo, el crecimiento y la fertilidad de los nematodos. Sin embargo, sí se detectaron diferencias en la reproducción de los nematodos tratados porque disminuyó el número de descendientes en comparación con los controles.