Bacilo Calmette-Guerin (BCG) reduce la expresión del FGFR3 en la línea de cáncer de vejiga humana UMUC14 asociado con un incremento de vías pro-apoptóticas y un descenso en vías de sobrevida

LAUTARO PIRICH, ; DENISE BELGOROSKY, ; BELÉN AMATO, ; MACARENA ZAMBRANO, ; CATALINA LODILLINSKY, ; ANA MARIA EIJAN; YANINA LANGLE

Jornada; XXXIV Jornadas Multidisciplinarias de Oncologia Instituto A.H.Roffo; 2019

Bacilo Calmette-Guerin (BCG) es el tratamiento estándar para el cáncer de vejiga (CaV) de alto grado no invasor del músculo (NMI). Usando un modelo de CaV murino ortotópico, hemos demostrado que BCG induce la inhibición del crecimiento tumoral, asociado con el descenso de la expresión del receptor 3 para el factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR3).El objetivo fue estudiar el efecto del tratamiento con BCG sobre la línea celular humana de CaV UMUC14, que sobreexpresa un FGFR3 constitutivamente activo, a través de: a) la viabilidad celular y la expresión de FGFR3 y b) la vía de sobrevida PI3K y las vías pro-apoptóticas mediadas por Catepsina B y Caspasa 3.Métodos: La línea de CaV UMUC14 fue tratada con +/-BCG (2mg/ml) por 24hs y 48hs. La viabilidad fue evaluada por MTS y la expresión de FGFR3 por qPCR y western blot. AKT, pAKT, Catepsina B, Caspasa 3 y PARP fueron analizados por western blot.Resultados: a) BCG reduce la viabilidad celular ( p≤0.001) y la expresión de FGFR3 (50%, p≤0.016) en la línea UMUC14. La transfección con un plásmido de expresión que lleva la forma salvaje o una forma mutante con activación constitutiva (K650E) de FGFR3 incrementan la viabilidad de UMUC14 un 50% (p≤0.01) y 100% (p≤0.001) respectivamente comparado con células control. Por otro lado, el tratamiento con BGJ398 (un inhibidor farmacológico de FGFR3) reduce la viabilidad de UMUC14 en concentraciones mayores a 100nM (p≤0.001). b) La reducción en la viabilidad celular en respuesta a BCG estuvo asociada con un descenso del 40% de la expresión de AKT total luego de 24hs de tratamiento (sin diferencias en pAKT). Observamos incremento de las vías apoptóticas como consecuencia de la activación (clivaje) de Catepsina B y Caspasa 3. La actividad de Caspasa 3 fue confirmada por clivaje de PARP.