Validación de una metodología por LC-MS/MS para determinar fitoprostanos y fitofuranos como biomarcadores del estrés oxidativo y aplicación en hojas de plantas de melón.

YONNY, M. E.; RODRÍGUEZ TORRESI, ARIEL; REVERSAT, G.; CUYAMENDOUS, C.; OGER, C.; GALANO, J.M.; DURAND, T.; VIGOR, C.; NAZARENO M.A.

Río Cuarto

Congreso; 9 Congreso Argentino de Química Analítica; 2017

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

En la producción temprana del melón, las temperaturas extremas generan un estrés abiótico en las plantas, que trae aparejado un incremento en la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS)1. Las ROS son las responsables del estrés oxidativo en la planta debido a que oxidan a los lípidos insaturados de las membranas celulares, tal como el ácido α-linolénico. Dicha reacción origina una serie isomérica de productos de oxidación temprana llamados fitoprostanos (FitoPs). Estos son reconocidos marcadores del estrés oxidativo. La oxidación del AAL conduce también a la formación de otros metabolitos, los fitofuranos (FitoFs).2 El objetivo de este trabajo fue validar una metodología de cuantificación de FitoPs y FitoFs mediante un sistema microLC-MS/MS; y aplicarla en un experimento para monitorear el nivel de estrés oxidativo en plantas de melón cultivadas en condiciones de producción temprana.Resultados y ConclusionesEl pre-tratamiento de muestra optimizado incluye extracción sólido-líquido e hidrólisis alcalina, seguida de extracción en fase sólida. Luego de validar el proceso de cuantificación, en condiciones cromatográficas y de espectrometría de masas previamente optimizadas, la respuesta del detector fue lineal en el intervalo 0,4-51,2 pg/µL (R2>0,9980) para todos los analitos. Los porcentajes RSD como medida de la precisión intra e interdía no superaron el 10 %; y la recuperación de los analitos, como parámetro de exactitud, fue de entre 81-106 %. Los valores de LOD y LOQ se establecieron en los rangos: 0,0041-0,015 pg/µL, y 0,009-0,052 pg/µL, respectivamente. La metodología validada se aplicó para evaluar el nivel de FitoPs y FitoFs en hojas de plantas de melón cultivadas bajo condiciones de estrés térmico. Se evaluó además la capacidad de un extracto acuoso antioxidante de Ilex paraguariensis,3aplicado previamente a la exposición al estrés para atenuar los efectos de las temperaturas extremas. Se registraron niveles significativamente superiores de FitoPs y FitoFs plantas estresadas respecto de los controles, y estos niveles disminuyeron significativamente en las plantas estresadas tratadas con IP respecto de aquellas plantas estresadas sin tratar. La metodología propuesta resultó selectiva, sensible, reproducible, y aplicable para separar, identificar y cuantificar seis FitoPs y dos FitoFs en hojas de plantas de melón como biomarcadores del estrés oxidativo inducido por estrés térmico.