Tecnica de cultivo de linfocitos en Rhinella arenarum y Boana pulchella sin sacrificio de los ejemplares.

AGÜERO R; MORENO L.E; VASQUEZ GOMEZ M.E

Buenos Aires

Congreso; III CONGRESO LATINOAMERICANO DE MÉTODOS ALTERNATIVOS AL USO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN EN EDUCACIÓN, INVESTIGACIÓN E INDUSTRIA; 2018

Asociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio (AACyTAL)

En los anfibios, el método directo es una técnica de rutina para la caracterización citogenética de las distintas especies, con la administración de colchicina, in vitro o in vivo a los ejemplares y el sacrificio de los mismos. El objetivo de este trabajo fue desarrollar la técnica de cultivo de linfocitos para la especie Rhinella arenarum y luego realizar una microcultivo para la especie Boana pulchella (de menor tamaño) sin el sacrificio de los mismos. Los ejemplares machos de ambas especies fueron colectados en San Luis (Argentina) y las muestras de sangre fueron obtenidas por punción cardiaca. Las variables utilizadas fueron: distintos medios de cultivo (RPMI 1690 con HEPES y Glutamina, MEM y F10) y diferentes volúmenes de fitohemaglutinina, penicilina-estreptomicina, suero fetal bovino y colchicina. Para la estandarización del protocolo nos basamos en técnicas de cultivos de células en peces y humanos. Los parámetros estandarizados fueron: Volumen de sangre mínimo obtenido por punción cardiaca (100 μl en el caso de R. arenarum y 20 μl de B. pulchella); El Medio de cultivo fue RPMI 1640 (5000 μl en R. arenarum y 1000 μl en B. pulchella); Se utilizó Suero Fetal Bovino (500 μl en R. arenarum y 100 μl en B. pulchella); Fitohemaglutinina (10 μl R. arenarum y 1 μl en B. pulchella); y Colchicina (100 μl en R. arenarum y 20 μl en B. pulchella) con un tiempo de incubación de 12 h a 28 °C. El protocolo de cultivo de linfocitos es una técnica simple y económica que no requiere equipamiento de alta complejidad. Esta puede ser usada para los distintos estudios citogenético posteriores y su implementación permite trabajar con ejemplares en peligro de extinción o amenazados, debido a que sólo se requeriría un pequeño volumen de sangre para su caracterización y no requiere el sacrificio del ejemplar.