GENOMA COMPLETO DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B (HBV) PROVENIENTE DE DONANTES DE SANGRE DE MISIONES: ES NECESARIO PROPONER UNA NUEVA CLASIFICICACION FILOGENETICA PARA LOS SUBGENOTIPOS D?.

CÁNEPA C, PATACCINI G, GENTILE E, CUESTAS ML, CASTILLO AM, BERINI C, MALAN R, PEDROZO W, OUBIÑA J, BIGLIONE M, MATHET V, DELFINO C.

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología. Septiembre 23-26, 2013.; 2013

AAM

Introducci¨®nExisten 9 genotipos de HBV (A-H, J) y m¨²ltiples subgenotipos (SG) con diferente distribuci¨®n mundial. Por convenci¨®n, la divergencia entre genotipos es del 8% como m¨ªnimo y mayor al 4% entre subgenotipos, bas¨¢ndose en el an¨¢lisis de secuencias de genoma completo. Para el genotipo D se han identificado 9 subgenotipos (D1-D9). Sin embargo, en muchas ocasiones dicha clasificaci¨®n se basa en estudios de fragmentos del genoma, con lo cual los valores reportados pueden no reflejar la divergencia real entre las distintas cepas estudiadas. En Argentina se han descripto varios subgenotipos de D en diferentes poblaciones y regiones del pa¨ªs. Nuestro grupo observ¨® que 2 secuencias nucleot¨ªdicas de la regi¨®n parcial del gen S de HBV (CM1, CM4) provenientes de donantes de sangre de la provincia de Misiones agruparon en el ¨¢rbol filogen¨¦tico con secuencias reportadas previamente como recombinantes  D3/D6, detectadas en el sur de Brasil.ObjetivosClasificar las cepas de HBV CM1 y CM4 mediante el an¨¢lisis filogen¨¦tico del genoma completo, respetando los porcentajes de divergencia establecidos mundialmente para la clasificaci¨®n en subgenotipos. Evaluar el estado de situaci¨®n en la subclasificaci¨®n del genotipo D de HBV en base al an¨¢lisis filogen¨¦tico de todas las secuencias de genoma completo de dicho genotipo depositadas en el GenBank.Materiales y M¨¦todos Se amplific¨® el genoma completo de HBV de las muestras CM1 y CM4 provenientes de donantes de sangre de la provincia de Misiones por n-PCR. La matriz de identidad para CM1 y CM4 fue construida con secuencias de genoma completo de SG D3 y la totalidad de las secuencias D6 depositadas en el GenBank (Bioedit 7.1). Las secuencias CM1 y CM4 fueron alineadas (Clustal W) con todas las secuencias de genoma completo de HBV de genotipo D disponibles en el GenBank. Se construy¨® un ¨¢rbol filogen¨¦tico (Neighbor-joining, MEGA v 5.0) y el an¨¢lisis estad¨ªstico se realiz¨® mediante Bootstrap con 1000 r¨¦plicas.ResultadosEn la matriz de identidad de CM1 y CM4 se documentaron valores entre 0,966% y 0,978% al comparar con secuencias  SG D3 y entre 0,962% y 0,973% al compararlas con D6, presentando un 2% de divergencia con las restantes cepas de SG D3 detectadas en este estudio. Por otro lado, al analizar la divergencia entre los SG de D reportados en el GenBank se observa que en algunos casos no se cumple con el criterio de divergencia establecido (¡Ý4%).Conclusiones En este estudio se determin¨® que las secuencias CM1 y CM4 pertenecen al SG D3, document¨¢ndose una importante diversidad regional para este SG de HBV. Se observ¨® una subclasificaci¨®n excesiva del genotipo D de HBV,  luego de realizar el an¨¢lisis filogen¨¦tico de todas las secuencias de genoma completo publicadas en el  GenBank. Este hecho amerita una reclasificaci¨®n del genotipo D en subgenotipos mediante el an¨¢lisis del genoma completo y respetando el 4% de divergencia establecido mundialmente para la clasificaci¨®n en subgenotipos.