EVALUACIÓN DEL ROL DE LA INTEGRINA ALFA 5 (α5) DURANTE LA REPROGRAMACIÓN

NEIMAN G; MESQUITA F; GARATE X; MORO L; LUZZANI C; ROMORINI L; SEVLEVER G; GUBERMAN A; MIRIUKA S

Congreso; reunion anual de la SAIC 2015; 2015

Las células madre pluripotentes inducidas (CMPI) se obtienen a travésde la generación de células madre a partir de células somáticasadultas. Existen cuatro factores que producen células con morfologíay funcionalidad similares a células madre embrionarias a partir de laactivación de genes asociados a pluripotencia y a la represión degenes de la diferenciación. Existe interés creciente en estudiar el rolde la matrix extracelular (MEx) tanto en las CMPI como en sureprogramación. La MEx es una compleja red que no solo funcionacomo sostén de las células, sino que presenta funciones deseñalización a través de receptores de membrana llamados integrinasque interaccionan principalmente con proteínas estructurales de MExcomo Fibronectina (FN). Nuestro objetivo consiste en averiguar el rolde la integrina α5 en la reprogramación de fibroblastos humanos (HFFFM) y cuya interacción se da con FN. Desarrollamos una línea celularestable inducible de fibroblastos humanos HFF FM que al tratarla condoxyciclina, disminuye la expresión de α5. Por qRT-PCR, observamosuna disminución de la expresión de ésta integrina en un 75%, lo quetambién fue verificado por citometría. Al evaluar la proliferación de losHFF FM α5, obtuvimos una disminución de ésta en un40%. Resultados preliminares del silenciamiento de α5 medianteedición génica a través del sistema CrispR-Cas9 muestra también unadisminución de la proliferación. Por citometría evaluamos la eficienciade reprogramación en fibroblastos humanos wt y α5 a partir de lainfección viral con el plásmido STEMCCA. Mantuvimos a lo largo detres semanas la integrina α5 silenciada y evaluamos el grado dereprogramación mediante la medición de dos marcadores depluripotencia, SSEA-4 y TRA 1-60. Obtuvimos una caída significativaen la expresión de estos marcadores. Concluimos que silenciando laintegrina α5, se afecta la proliferación de los fibroblastos y porconsiguiente la potencialidad de fibroblastos para ser reprogramados.