LA ISOFORMA DE FIBRONECTINA QUE INCLUYE EL EXÓN EDA INDUCE UN AUMENTO EN LA PROLIFERACIÓN TANTO DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS DE RATÓN COMO HUMANAS INCREMENTANDO LA PROPORCIÓN DE CÉLULAS EN FASE S DEL CICLO CELULAR

LOSINO N; SOLARI C; WAISMAN A; LUZZANI C; COSENTINO S; SASSONE A; FERNANDEZ ESPINOSA D; MURO A F; MIRIUKA S; BARAÑAO L; GUBERMAN A

Mar del Plata

Congreso; SAIC 2013; 2013

SAIC

Las células madre embrionarias (CME) poseen la capacidad deauto-renovarse indefinidamente in vitro y de dar origen a célulasde las tres capas embrionarias, propiedad conocida como pluripotencia,lo que las convierte en una herramienta promisoria enmedicina regenerativa. Anteriormente, demostramos mediante elensayo de MTT que una isoforma de fibronectina (FN) que incluyeel exón EDA (FN EDA+) aumentaba la proliferación de CME deratón. En este trabajo, con el propósito de extender y profundizardicho hallazgo, estudiamos si esta molécula también aumentabala proliferación de CME humanas. Asimismo, con el objetivo deanalizar si FN EDA+ alteraba la proporción de células en fase S,evaluamos este parámetro mediante la incorporación del análogode nucleótido BrdU. Mediante dos abordajes experimentalesdiferentes proporcionamos FN EDA+ a las CME humanas y CMEde ratón. Por un lado, utilizamos medios condicionados por líneasde fibroblastos embrionarios (MEF) provenientes de ratones modificadosgenéticamente. Los MEF derivados de ratones wild typeexpresan ambas isoformas (FN EDA+ y FN EDA-); los MEF +/+tienen modificado el sitio de splicing, de tal forma que siempreincluyen EDA y finalmente, los MEF -/-, secretan solo FN EDA-,dado que carecen de dicho exón. Por otra parte, suplementamosel medio de proliferación estándar (MP) con un péptido recombinantecorrespondiente a una porción de FN que incluye o noEDA. Mediante los ensayos de cristal violeta, sanado de heriday/o BrdU demostramos que la presencia de este dominio indujo unaumento de proliferación en todos los casos. Asimismo, observamosque tanto en CME humanas como de ratón, la proporción decélulas en fase S del ciclo celular resultó mayor en presencia deEDA. El aumento de la proliferación inducido por esta moléculaen ambas especies sugiere un posible mecanismo conservado.Esperamos contribuir a mejorar las condiciones de cultivo para lafutura aplicación terapéutica de las células madre.