Estudio del control de la expresión de genes relacionados con la defensa ante el estrés oxidativo y con el remodelado de la cromatina por parte de los factores de transcripción fundamentales de células madre pluripotentes

SOLARI C; WAISMAN A; COSENTINO S; LUZZANI C; LOSINO N; VAZQUEZ ECHEGARAY C; ROMORINI L; QUESTA M; MIRIUKA S; BARAÑAO L; GUBERMAN A

Mar del Plata, Argentina

Congreso; SAIC 2013; 2013

SAIC

Las células madre (CM) embrionarias (CME) y las CM pluripotentes (CMP) inducidas (CMPI) poseen dos propiedades fundamentales: la autorrenovación, que es la capacidad de proliferar indefinidamente en cultivo, y la pluripotencia, que es el potencial de diferenciarse a todos los tipos celulares del organismo. Estas propiedades inherentes al estado indiferenciado son mantenidas por una serie de factores de transcripción (FT) específicos, siendo los más importantes Oct4, Sox2 y Nanog. Nuestra hipótesis es que estos FT específicos regulan la expresión de genes involucrados en diversos mecanismos celulares. Nos centramos particularmente en la regulación de la estructura de la cromatina, ya que durante la diferenciación ocurren cambios en su organización a nivel global y de loci específicos; y en la defensa frente al estrés oxidativo, dado que la estabilidad genómica es esencial en CMP para evitar la propagación de daños genéticos. En este trabajo estudiamos los genes Myst2, Myst3, Myst4, Prmt8, Atf7ip, Taf15, Sod1, Sod2, Txn1, Txn2, Gpx1 entre otros. En primer lugar, realizamos un análisis in silico de las regiones promotoras en busca de secuencias consenso de unión de dichos FT. Luego analizamos el perfil de expresión de los genes seleccionados mediante RT-qPCR en CME y en CMPI, tanto en estado indiferenciado como durante la diferenciación, utilizando distintos protocolos de diferenciación. Continuamos estudiando aquellos genes que presentaron un patrón en la modificación de su expresión a lo largo de este proceso. Con el propósito de estudiar su regulación por los mencionados FT, analizamos sus niveles endógenos en sistemas heterólogos transfectados con dichos FT. Estamos estudiando la regulación de los promotores de algunos de los genes seleccionados mediante construcciones reporteras. Además, mediante un sistema lentiviral de silenciamiento génico, estudiaremos su relevancia en el mantenimiento del estado indiferenciado y en los procesos de diferenciación.