La Fibronectina que incluye el exón ED-I aumenta la proliferación de células madre embrionarias

LOSINO N; SOLARI C; LUZZANI C; WAISMAN A; MURO A; BARAÑAO L; GUBERMAN A

Mar del Plata

Congreso; SAIC 2011; 2011

SAIC

Las células madre embrionarias de ratón (mCME) pueden ser propagadas en el mediocondicionado (MC) por la línea celular de granulosa bovina BGC, preservando sus propiedadesbásicas y aumentando su proliferación. La propiedad mitogénica de este medio fue reportadasobre células de granulosa, adjudicándole dicho efecto a la isoforma de fibronectina (FN) queincluye el exón ED-I (FN+ED-I). Nuestra hipótesis es que la FN+ED-I secretada por las BGC seríaresponsable del aumento en la proliferación de las CME. Nuestro objetivo es determinar si laFN+ED-I aumenta la proliferación en CME. Estudiamos este proceso mediante el ensayo de MTTy analizamos el tamaño de las colonias. Evaluamos el efecto de medios condicionados pordistintas líneas de fibroblastos embrionarios murinos (MEF). Las CME propagadas en el MC deMEF +/+, que secretan solo FN+ED-I, proliferaron más que en MC MEF wt, que secreta ambasformas y éstas más que en MC de MEF -/-, que secretan solo FN que excluye ED-I. Tambiénevaluamos el efecto de un péptido de FN que incluye o no el exón ED-I, agregado al medio deproliferación (MP). El péptido FN+ED-I aumentó la tasa de proliferación de manera dosisdependiente. Al analizar si el MC de BGC afecta la inclusión de ED-I por las CME, para estudiar sihay un efecto sobre la FN endógena, comparamos la expresión de estas dos formas en CMEcultivadas en MC y MP. Por RT-PCR detectamos que las CME al igual que la línea BGC, expresanambas isoformas. Sin embargo, el MC no afectó la inclusión de ED-I por las CME. En síntesis,demostramos que la FN-EDI aumenta la proliferación en CME. Planificamos silenciar la expresiónde FN+ED-I en las BGC para determinar su contribución en este efecto. Resultados preliminaresindican que el MC de BGC no afecta la proliferación de células madre pluripotentes inducidas,evidenciando un mecanismo diferente. La comprensión de estos procesos puede contribuir a lafutura aplicación terapéutica de las células madre.