ESTUDIO DEL ROL DE LAS ENZIMAS MODIFICADORAS DE LA CROMATINA MYST2 Y PRMT8 EN CELULAS MADRE EMBRIONARIAS

LUZZANI C; WAISMAN A; SOLARI C; LOSINO N; BARAÑAO L; MIRIUKA S; GUBERMAN A

Mar del Plata

Congreso; SAIC 2011; 2011

SAIC

Las Células Madre Embrionarias (CME) poseen la capacidad de proliferar indefinidamente in vitroy pueden ser diferenciadas a múltiples tipos celulares de interés. Durante la diferenciaciónocurren cambios en la organización de la cromatina a nivel global y de loci específicos. Nuestrahipótesis es que ciertos factores de transcripción específicos de CME, como Oct3/4, SOX2 yNanog, regulan la expresión de genes que codifican para enzimas modificadoras de la cromatinay que éstas, a su vez, podrían modular la expresión de los primeros. Anteriormente, estudiamos laregulación transcripcional de ciertas enzimas durante la diferenciación de células madrepluripotentes. En este trabajo, estudiamos la relevancia de dos de ellas, Myst2 y Prmt8, sobre elmantenimiento de la pluripotencia y la diferenciación de CME. , En primer lugar, realizamos unestudio in silico de sus promotores en búsqueda de posibles sitios de unión de Oct3/4, SOX2 yNanog y diseñamos primers que nos permitirán confirmar, mediante el ensayo deimunoprecipitación de la cromatina, su interacción con los factores de transcripción de CME.Luego, diseñamos una serie de shRNAs (short hairpin RNAs) específicos para cada uno de estosgenes con el objetivo de silenciarlos y los clonamos en un vector lentiviral que posee loselementos necesarios para su correcta expresión. Establecimos líneas de CME que expresanestablemente estos shRNAs y determinamos por RT-qPCR la disminución de los niveles de mRNAcorrespondientes. Nos encontramos analizando los marcadores de pluripotencia de estas líneascelulares y estudiando el rol que estas enzimas pueden tener en los procesos de diferenciación,analizando la morfología, el tamaño, la frecuencia de formación y la expresión de marcadores enlos cuerpos embrioides derivados de las mismas.