GENERACIÓN DE DISTINTAS LÍNEAS DE CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS HUMANAS

QUESTA M; BLUGUERMANN C; FERNANDEZ ESPINOSA D; SOLARI C; ROMORINI L; SCASSA M; CIBELLI J; SEVLEVER G; GUBERMAN A; MIRIUKA S

Congreso; SAIC 2011; 2011

SAIC

La reprogramación de células somáticas a Células Madre Pluripotentes Inducidas (CMPi) es unrecurso invaluable que permite la generación de células específicas de paciente de cualquierlinaje, sin recurrir a material embrionario. Los criterios para su validez son: morfología de célulaspluripotentes, auto-renovación ilimitada, expresión de marcadores de pluripotencia,downregulación de marcadores de diferenciación, independencia de factores utilizados yconformidad con pruebas de diferenciación.El objetivo fue la reprogramación de fibroblastos a CMPi mediante distintas técnicas ycondiciones, comparando eficiencias y caracterizando las líneas.La reprogramación se realizó a través de la introducción de Factores de Transcripciónembrionarios, Oct4, Klf4, Sox2 y c-Myc, mediante 2 sistemas lentivirales distintos.Se generaron 3 líneas de aparentes CMPi con colonias morfológicamente similares a célulaspluripotentes. Se caracterizaron para pluripotencialidad mediante microscopía de fluorescencia,encontrándose presencia de marcadores como Oct4, Nanog, Tra-1-60, Tra-1-81 y SSEA-4 y altaactividad de AP. Para las líneas iPSC1.5 e iPSC6.1 se realizó Real Time PCR de estosmarcadores y diferenciación espontánea observándose la presencia de marcadores de las trescapas germinales, como alfa-fetoproteína, actina de músculo liso y Pax6, confirmando lapluripotencialidad in vitro. Para las CMPi iPSC6.1 diferenciadas se observaron zonas contráctiles,con expresión de marcadores cardiacos (cTnT, ANP, Nkx2.5) correspondiente a cardiomiocitos y se comprobó el cariotipo normal.Se compararon eficiencias en la generación de CMPi en distintas condiciones, comprobándoseuna eficiencia de reprogramación de 0,01% que aumenta cuando las células son neonatales ycuando los fibroblastos son mantenidos en un medio rico en SFB.En conclusión la generación de CMPi es posible a partir de distintas poblaciones celulares y conla utilización de distintos vectores.