RELEVANCIA DE LA VÍA DE SEÑALIZACIÓN DE AKT SOBRE LA SUPERVIVENCIA DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS

ROMORINI L; FERNANDEZ ESPINOSA D; BLUGUERMANN C; VIDELA RICHARDSON G; QUESTA M; SEVLEVER G; GUBERMAN A; MIRIUKA S

Congreso; SAIC 2011; 2011

SAIC

Las células madre embrionarias humanas (CMEh) presentan gran capacidad para diferenciarse invitro y enorme potencial para ser usadas como fuente celular en medicina regenerativa. El factorde crecimiento fibroblástico básico (bFGF) es fundamental para la supervivencia y elmantenimiento de la pluripotencia y auto-renovación de CMEh. bFGF activa la vía de PI3K/AKT enCMEh, por ende el objetivo de este trabajo es estudiar la relevancia y mecanismos molecularesinvolucrados en la supervivencia celular mediada por AKT en CMEh. Para ello, se cultivaron laslíneas de CMEh WA01 (H1) y WA09 (H9) en presencia de bFGF hasta confluencia, y luego sunaturaleza pluripotente fue validada mediante inmunofluorescencia y RT-PCR de los marcadores:TRA1-60, TRA1-81, SSEA-4, Oct-4 y Nanog. La viabilidad celular, medida con el ensayo de XTT,disminuyó de manera concentración dependiente luego del tratamiento durante 24 h tanto con losinhibidores de la PI3K, LY294002 y wortmanina, como con inhibidores que actúan río abajo, comoel inhibidor IV de AKT, específico de una quinasa que activa a AKT; el inhibidor VIII de AKT, queimpide la unión de AKT a membrana y GSK690693, que bloquea el sitio de unión del ATP a AKT;(LY294002 10μM: 57±3,8% y 56,6±7%; wortmanina 100nM: 38,6±3,3% y 42,5±7,2%; I. IV 1μM:64,9±6,8% y 82,2±7,6%; I.VIII 10μM: 57,4±4,4% y 47,1±4%; GSK690693 1μM: 51,2±3% y 51,8±5%,vs. vehículo para H9 y H1, respectivamente). Por otro lado, se observó un aumento en lafragmentación del ADN, cuantificado por ensayo fotométrico de ELISA, en H9 y H1, al inhibir AKTdurante 8 h (1,8 y 1,4 veces de inducción vs. vehículo I. IV 1μM; 3,3 y 2,7 I. VIII 10μM; 2 y 1,9GSK690693 1μM). Por último, se observó la activación de caspasa-3 y el clivaje de PARP, ambosmedidos por Western Blot, a partir de 4 h de tratamiento con los inhibidores mencionados.Finalmente, podemos concluir que la señalización mediada por AKT es anti-apoptótica y por enderelevante en la supervivencia celular de CMEh.