INVESTIGADORES
CORRADI Gerardo Raul
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de parámetros relacionados con la expresión en bacterias de una proteína del grupo de las calflaginas de Trypanosoma cruzi de potencial interés diagnóstico.
Autor/es:
CORRADI G; , MARCIPAR IS; , MARCIPAR AJ; SILBER AS
Lugar:
Huerta Grande Córdoba
Reunión:
Congreso; Sociedad Argentina de Parasitología y Enfermedades Parasitarias; 2000
Resumen:
Las proteínas del grupo de las caiflaginas de Trypanosoma cruzi han sido descriptas como relevantes respecto de su utilidad para el diagnóstico de la infección en humanos. En este sentido se consideró de interés el análisis de los parámetros que afectan la expresión de esta molécula, En el presente trabajo se ha evaluado la expresión en Escherichia coli de esta proteína donada en diferentes vectores: pET32, pRSET, pGEX, pMAL y pQE32. Para la construcción en pRSET se evaluó además la incidencia en la expresión de la concentración de los iones 0a2 y Mg2, la concentración del medio de cultivo, y distintas condiciones de inducción (concentración de IPTO, tiempo y temperatura). Para los vectores pOE32 y pRSET no se observaron altos niveles de expresión, siendo detectable el producto por western blot, pero no por tinción directa de geles de poliacrilamida con Coomasie. La adición de Ca2+ a una concentración 50 mM mejoró considerablemente la expresión. Sin embargo la expresión no tuvo el rendimiento esperado. La concentración del medio de cultivo, de IPTG, la temperatura y los distintos tiempos de inducción evaluados no tuvieron incidencia observable. Se observó sin embargo que los niveles de expresión aumentaron para las construcciones realizadas en pET32, haciéndose la proteína recombinante detectable por visualización directa por SDS-PAGE mediante tinción con Coomasie, Por otra parte, la expresión en pGEX fue aún más eficiente, pero se observó que la proteína recombinante se obtenía separada de la 351, lo cual dificulta su purificación. Finalmente se ha observado que se puede inducir la expresión de esta proteína como producto de fusión en el vector pMAL con muy alta eficiencia, siendo la proteína recombinante aproximadamente un 35-40% de la proteina total observada en un SDS-PAGE. Estos resultados indicarian que la proteína de interés se expresa con mayor eficiencia en los vectores en los que se produce como un producto de fusión.
